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[发明专利]一种菊花诱变育种方法-CN202310179849.9在审
发明人：洪波;黄洪峰;张世琦;赵国扬;顾钊宇 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2023-02-16 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种菊花诱变育种方法，建立方法包括如下步骤：取菊花‘绿安娜’的花瓣为外植体，进行外植体消毒；将消毒好的外植体接种于再生培养基中进行培养；将所得再生芽接入生根培养基中进行培养；对所得组培苗进行炼苗移栽，本发明通过筛选花瓣愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的最优植物生长调节剂种类和浓度获得最优再生及生根培养基，同时，本发明发现在再生过程中，以花瓣作为外植体，可产生变异植株，变异体现在花型、花色、瓣型等方面，再生植株变异率高，本发明建立了一个以‘绿安娜’花瓣为外植体的高效稳定的再生体系并获得再生突变植株，提供了一种通过组织培养再生的变异优株的方法，为菊花新品种选育奠定了基础。
一种菊花诱变育种方法

[发明专利]利用免疫共沉淀从苹果花粉管中获得级联激酶蛋白的方法-CN201810793938.1有效
发明人：李天忠;顾钊宇;杨清;李威;于杰;刘春生 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2018-07-19 - 公布日： 2021-07-23 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用免疫共沉淀从苹果花粉管中获得级联激酶蛋白的方法。本发明属于分子生物学和基因功能领域，涉及2个在苹果花粉管生长过程中发挥重要调控作用的促分裂原活化蛋白质激酶MdMAPK3和MdMAPKK4基因，MdMAPK3基因含有1110个核苷酸，编码370个氨基酸，属于MAPK家族成员；MdMAPKK4基因含有1068个核苷酸，编码356个氨基酸，属于MAPKK家族成员。本发明公开了在苹果自交不亲和反应中，由花粉管蛋白激酶MdMAPK3筛选上游蛋白激酶MdMAPKK4并验证其互作关系的方法。
利用免疫共沉淀苹果花粉管获得级联激酶蛋白方法

[发明专利]一种标记植物花粉微丝微管细胞骨架的方法及其试剂盒-CN201710081736.X有效
发明人：李天忠;杨清;顾钊宇;李威;李洋;于杰;刘春生 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2017-02-15 - 公布日： 2020-06-16 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供一种用于标记植物花粉微丝微管细胞骨架的试剂盒，包括花粉固定液试剂A，花粉洗涤液试剂B，花粉微丝染料试剂组合C，以及花粉微管染料试剂组合D。本发明还提供利用该试剂盒标记植物花粉微丝微管细胞骨架的方法，具体流程如下：培养花粉—固定花粉管—洗涤花粉管—微丝染料室温染色花粉管—微管染料室温染色花粉管—激光共聚焦显微镜观察。本方法可实现快速、灵敏、准确性高、简便地观察木本植物花粉管内微丝微管骨架结构与排列方式，为直观观察木本植物花粉管内微丝微管骨架结构与排列方式提供技术支持。
一种标记植物花粉微管细胞骨架方法及其试剂盒

[发明专利]一种提取木本植物花粉管核蛋白的方法及其试剂盒-CN201710179402.6有效
发明人：李天忠;顾钊宇;李威;杨清;李洋;于杰;刘春生 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2017-03-23 - 公布日： 2020-05-19 - 主分类号： C07K14/415 文献下载
摘要：本发明提供一种提取木本植物花粉管核蛋白的方法及其试剂盒。所述试剂盒中包括试剂A、试剂B和试剂C；所述试剂A中含有纤维素酶和离析酶，所述试剂B中含有Hepes、NaCl、MgCl2、NaF、PMSF和DTT，所述试剂C中含有丙三醇、TritonX‑100、DTT和PMSF。本发明以苹果花粉管为试材，通过收集、酶解花粉管壁后，进行核蛋白提取。采用本发明的方法可以提取大量、相对纯净的花粉管核蛋白，为直观鉴定木本植物花粉管内核蛋白的表达及定量提供技术体系。
一种提取木本植物花粉管核蛋白方法及其试剂盒

[发明专利]一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒及方法-CN201810748383.9有效
发明人：李天忠;杨清;顾钊宇;李威;李洋;于杰;刘春生 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2018-07-10 - 公布日： 2019-11-05 - 主分类号： G01N33/533 文献下载
摘要：本发明属于植物生物技术领域，涉及一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒及方法。先提供一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒，包括：花柱固定液试剂A，花柱洗涤液试剂B，微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D。再应用所述试剂盒标记微丝细胞骨架，步骤为：1)取授粉的花柱；2)用花柱固定液试剂A对花柱固定；3)用花柱洗涤液试剂B对花柱洗涤；4)用微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D的混合溶液对花柱染色；5)对花柱滴加抗荧光猝灭剂，在激光共聚焦显微镜下观察花柱中花粉管微丝细胞骨架。本发明所述试剂盒和方法实现了快速、灵敏、准确、简便地观察苹果花粉管内微丝骨架的结构与排列方式。
花柱微丝花粉管细胞骨架试剂盒授粉苹果免疫荧光试剂染料试剂固定液洗涤液胼胝质激光共聚焦显微镜植物生物技术荧光猝灭剂混合溶液排列方式微丝骨架染色滴加观察灵敏洗涤应用

[发明专利]利用自花授粉及异花授粉的苹果花柱筛选差异蛋白的方法-CN201811136170.7在审
发明人：李天忠;顾钊宇;李威;杨清;李洋;于杰;刘春生 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2018-09-28 - 公布日： 2019-03-15 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学和基因功能领域，涉及一种利用自花授粉及异花授粉的苹果花柱筛选差异蛋白的方法，涉及1个在苹果花柱自花授粉及异花授粉过程中差异表达的钙调蛋白结合转录因子。本发明公开了利用自花授粉及异花授粉的苹果花柱筛选差异蛋白的方法，自花授粉及异花授粉的苹果花柱所筛选的钙调蛋白结合转录因子差异倍数均在1‑1.5倍之间，明确了在苹果自花授粉过程中有钙调蛋白结合转录因子的参与。
自花授粉花柱异花授粉苹果结合转录因子差异蛋白钙调蛋白筛选分子生物学差异表达基因功能

[发明专利]一种动态记录苹果花粉管微丝形态的方法及其试剂盒-CN201810658372.1在审
发明人：李天忠;杨清;顾钊宇;李威;李洋;于杰;刘春生 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2018-06-25 - 公布日： 2018-12-14 - 主分类号： C12Q1/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种动态记录苹果花粉管微丝形态的方法及其试剂盒，本研究以同一地域、同一树龄(10年)、生长势一致的‘金冠’苹果树上的一年生枝条上的大气球期中心花为材料，经过花朵采摘，4℃低温短时期保存，花粉常温干燥、花粉基因枪轰击微丝的marker，Lat52‑lifeact基因，固体培养基培养2‑3h，激光共聚焦观察正常生长过程中微丝骨架排列方式。为直观观察木本植物花粉管内微丝骨架结构与排列方式提供技术支持。
花粉管微丝动态记录排列方式微丝骨架试剂盒苹果花粉木本植物固体培养基基因枪轰击激光共聚焦一年生枝条常温干燥花朵采摘技术支持生长过程大气球生长势观察树龄直观保存地域基因研究

[发明专利]一种定位木本植物花粉管蛋白的免疫荧光方法及其试剂盒-CN201710037998.6在审
发明人：李天忠;顾钊宇;杨清;李威;李洋;于杰 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2017-01-18 - 公布日： 2018-07-24 - 主分类号： G01N33/533 文献下载
摘要：本发明提供一种定位木本植物花粉管蛋白的免疫荧光方法及其试剂盒。所述试剂盒中包括固定液、酶解液、封闭液、一抗和二抗；所述固定液中含有PEPES、蔗糖、TritonX‑100、多聚甲醛、NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4，所述酶解液中含有纤维素酶、离析酶、NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4，所述封闭液中含有牛血清白蛋白、NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4，所述一抗为目的蛋白抗体，所述二抗为FITC标记的山羊抗兔二抗。本发明以苹果花粉管为试材，通过酶解花粉管壁后，进行免疫荧光标记。采用本发明的方法可以直接、高效、灵敏、特异性的定位花粉管中的功能蛋白，为直观鉴定木本植物花粉管内功能蛋白的表达及定位提供技术体系。
花粉管木本植物试剂盒二抗功能蛋白免疫荧光封闭液固定液酶解液一抗蛋白免疫荧光标记牛血清白蛋白多聚甲醛技术体系目的蛋白山羊抗兔纤维素酶离析酶蔗糖抗体酶解灵敏直观苹果

[发明专利]一种木本植物花粉基因枪瞬时转化方法及其试剂盒-CN201710039678.4在审
发明人：李天忠;杨清;顾钊宇;李威;李洋;于杰;刘春生 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2017-01-18 - 公布日： 2017-06-06 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明提供一种高效木本植物花粉基因枪瞬时转化方法及其试剂盒。所述试剂盒中包括以下试剂组合用于配制金粉悬液的试剂、用于制备DNA子弹的试剂以及花粉液体培养基。本发明以苹果花粉为试材，通过水合花粉、DNA子弹制备以及利用氦气轰击刚萌发的花粉粒，进行高效的基因枪瞬时转化。采用本发明的方法可实现快速、灵敏、准确性高、简便地验证木本植物材料花粉管基因的功能，为直观鉴定木本植物花粉管内基因表达及功能验证提供技术体系。
一种木本植物花粉基因瞬时转化方法及其试剂盒

[发明专利]垃圾焚烧发电炉渣混凝土的制备方法-CN201510178055.6有效
发明人：顾振清;顾钊宇;顾钊荣 -专利权人：广东环兴环保节能科技有限公司
申请日： 2015-04-16 - 公布日： 2017-01-25 - 主分类号： C04B28/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种垃圾焚烧发电炉渣混凝土的制备方法，该方法是在混凝土制备过程中，采用分两批加入丙烯酸树脂、分三批加入磁化水、分四次进行搅拌的方法，利用垃圾炉渣制备建筑材料，实现了资源的有效回收和利用，方法简单，制备效率高，生产过程环保，通过调整配比可获得不同强度等级的混凝土产品，最终获得的混凝土拌合充分且细致，抗压强度、耐水性佳、稳定性高，整体性能好。
垃圾焚烧发电炉渣混凝土制备方法

[发明专利]一种环保新型建筑用砖及制备方法-CN201310695989.8有效
发明人：顾振清;顾钊宇 -专利权人：广东环兴环保节能科技有限公司
申请日： 2013-12-18 - 公布日： 2014-03-26 - 主分类号： C04B28/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种环保新型建筑用砖及制备方法，属于废弃物处理技术领域，由硅酸盐水泥、石膏、GCY活化剂、MSZ168-C添加剂、粗炉渣、细炉渣、磁化水组成；其制备方法是先将炉渣垃圾焚烧发电厂排放的炉渣经过水解槽洗涤、破碎筛选、磁选、浮力分选、筛选3～15mm颗粒一系列预处理后，使用强制式搅拌机按设定配比将炉渣、MSZ168-C添加剂加入搅拌槽，再将GCY活化剂与经过磁化器处理的磁化水稀释与水泥一起加入搅拌，压制成型后进行养护即得成品；本发明实现了炉渣免烧制备成型砖，不仅缩短了制备时间，而且降低了燃烧能耗和避免了燃烧过程中有害气体的排出，环保效果突出；所制造的砖块强度高、重量轻、保温性能好，能够满足现代建筑对墙体材料的轻质节能隔热保温的要求。
一种环保新型建筑制备方法

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