本发明公开了一种用于制备检测丁型冠状病毒试剂盒的引物对及其应用，属于生物技术领域。所述引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的引物对能特异地扩增出样品中的丁型冠状病毒的ORF1ab基因片段，检测灵敏度高，最低检测限达6.19×10‑6ng/μL，结果准确，可将其应用到对丁型冠状病毒的检测和鉴定当中。该引物对对丁型冠状病毒的不同毒株的检测具有通用性，可应用于鸟类粪便样品中丁型冠状病毒核酸的检测。本发明为今后对该病的流行检测和防控提供检测工具。
本发明公开了一种环形RNA高效表达载体，其具有如SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列，包括长度为92bp的上游骨架序列、长度为75bp的下游骨架序列和位于二者间用于插入待环化基因的酶切位点EcoRI，表达框架全长仅为173bp，本发明构建的环形RNA表达载体能够使外源插入序列高效地表达环形RNA，为环形RNA的获得提供了一种高效表达工具，在保证circRNA高效环化的前提下，对其成环所需的上下游侧翼序列的长度进行了高度优化，进一步降低侧翼序列带来的剪接副产物复杂度。
本发明公开了一种用于传染性支气管炎病毒中和抗体检测的ELISA试剂盒及其应用，属于生物技术领域。所述试剂盒包括：由S1蛋白中和抗原表位融合蛋白包被的酶联反应板，所述融合蛋白包括传染性支气管炎病毒编码的S1蛋白中的四个中和抗原表位，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1‑4所示。本发明利用筛选鉴定的4个具有中和活性的抗原表位，将其进行串联融合表达出蛋白，作为检测抗原，建立一种简便、特异的中和抗体ELISA方法。该检测抗原对流行毒株具有通用性，能够在实际生产中快速检测鸡群血清样本中是否含有中和抗体，为准确判断鸡群免疫是否有效提供依据，为传染性支气管炎疫病的有效防控提供参考。
