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[发明专利]一种用于生产麦角硫因的毕赤酵母菌株及其构建方法和应用-CN202310291125.3有效
发明人：张目;黄晓东;胡晓清 -专利权人：广州悦荟化妆品有限公司
申请日： 2023-03-23 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及麦角硫因合成技术领域，具体公开了一种用于生产麦角硫因的毕赤酵母菌株及其构建方法和应用。所述毕赤酵母菌株同时过表达egt1基因、egt2基因和XP_002490234基因。本发明首次在毕赤酵母中表达麦角硫因合成途径基因egt1和egt2，并同时过表达XP_002490234基因，实现麦角硫因的高效合成，并且毕赤酵母菌株可以高密度培养，调节氧化/过氧化状态，解决了毕赤酵母细胞氧化损伤削弱麦角硫因产量的问题。本发明在毕赤酵母GS115基础上转化egt1基因、egt2基因，同时过表达XP_002490234.1基因后，毕赤酵母菌株的麦角硫因产率达782mg/L，具备工业生产前景。
一种用于生产麦角酵母菌株及其构建方法应用

[发明专利]一种高效生产克拉酸的重组大肠杆菌及其应用-CN202111151501.6有效
发明人：王小元;乔君;詹依;檀昕;胡晓清 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-09-29 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效生产克拉酸的重组大肠杆菌及其应用，属于基因工程、发酵工程和材料科学领域。本发明通过编辑CA合成的关键基因，构建了过量生产CA的突变体；然后通过单因素和响应面法获得最优培养基，并对发酵罐中的发酵条件进行优化。采用本发明的方法制备得到的CA的产量达到19.79g/L，高于已知的最大产量(10.39g/L)，提高了90.47％。此外，对利用本发明的方法制备得到的CA进行了性质的表征，证明其具有优良的性质，如固体形态、分子量、空间结构、链构象、热学和流变学性质等。本发明中CA的高产为规模化生产和CA性质研究提供了夯实的基础，CA性质的揭示为CA的开发利用提供了坚实的理论基础。
一种高效生产克拉重组大肠杆菌及其应用

[发明专利]一种构建高效分泌表达克拉酸重组大肠杆菌的方法-CN202310593654.9在审
发明人：王小元;吴佳欣;胡晓清;黄铭 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-05-24 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种构建高效分泌表达克拉酸重组大肠杆菌的方法，属于基因工程和发酵工程技术领域。本发明提供了一种大肠杆菌基因工程菌，所述基因工程菌为，敲除了大肠杆菌MG1655基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waa(L‑Q)，并敲除了基因组上的Lon蛋白编码基因lon，并敲除了基因组上的HNS调节蛋白编码基因hns；同时敲除了基因组上的心磷脂的编码基因clsA，clsB和clsC中的一个或多个。采用本发明的方法制备得到的克拉酸的最大产量为22.45g·L‑1，为出发菌株MG1655的187倍。在1.5L发酵罐中扩大化培养后，最大产量为44.86g·L‑1。
一种构建高效分泌表达克拉重组大肠杆菌方法

[发明专利]一株不依赖抗生素并能高效生产γ-氨基丁酸的谷氨酸棒杆菌的构建-CN202110861544.7有效
发明人：王小元;姚城镇;胡晓清 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-07-29 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一株不依赖抗生素并能高效生产γ‑氨基丁酸的谷氨酸棒杆菌的构建，属于基因工程和微生物发酵技术领域。以谷氨酸棒杆菌ATCC 13032为出发菌株，将来源于Lactobacillusbrevis的谷氨酸脱羧酶基因整合入谷氨酸棒杆菌基因组中，构建γ‑氨基丁酸(GABA)的生产菌株，该菌株以葡萄糖为碳源，利用直接发酵法即可得到GABA。本发明所用的基因表达调控均位于基因组中，不依赖质粒表达系统，因此不需要向培养基中额外添加抗生素。同时在本发明中，强化了磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶和柠檬酸合酶的共表达。最终通过分批补料发酵的方法得到GABA的产量为58.3g/L。
不依赖抗生素高效生产氨基丁酸谷氨酸杆菌构建

[发明专利]一种提高可拉酸生物合成的基因工程方法-CN202310372358.6在审
发明人： 胡晓清;刘敏敏;王小元;吴佳欣 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-04-10 - 公布日： 2023-07-28 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高可拉酸生物合成的基因工程方法，属于基因工程技术领域。本发明在大肠杆菌EscherichiacolistrK‑12W3110基因组中同时敲除或沉默负责监管调控鞭毛II类基因的flgM基因和编码全局调控因子δ54的rpoN基因，使构建的基因工程菌W3110ΔflgMΔrpoN的可拉酸产量显著增加，将菌株产量从初始菌株的10mg/L提高到3.74g/L，较原始菌株EscherichiacolistrK‑12W3110提高374倍，在转录水平上显著增强了可拉酸合成相关基因簇及UTP‑1‑磷酸葡萄糖尿苷酰转移酶编码基因galU的表达，降低了Lon蛋白编码基因lon及HNS调节蛋白编码基因hns的表达。同时，利用M9发酵培养基生产可拉酸，能够减少碳源的投入，降低成本。
一种提高可拉生物合成基因工程方法

[发明专利]一株高效生产克拉酸的脂多糖结构截短的大肠杆菌菌株的构建-CN202210724913.2有效
发明人：王小元;詹依;乔君;胡晓清 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-06-23 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一株高效生产克拉酸的脂多糖结构截短的大肠杆菌菌株的构建，属于基因工程和发酵工程领域。本发明通过在脂多糖截短的大肠杆菌WQM001菌株基础之上继续删除ackA，rfbB，rfbD，rfbA，rfbC，rfbX，glf，wbbH，wbbI，wbbJ，wbbK以及wbbL基因构建得到WZM008菌株。随后通过构建pTrcS质粒过表达uppS基因，并将该质粒导入WZM008成功构建WZM008/pTrcS重组菌株。WZM008/pTrcS重组菌上罐水平达到11.68g·L‑1，是出发菌株克拉酸产量的3.54倍。且根据本发明制备得到的克拉酸，分子量可达11.4×103kDa，具备三螺旋结构。本发明首次探究了代谢途径改造对克拉酸生产的影响，为后续代谢工程改造大肠杆菌构建克拉酸高产菌株提供了新思路，同时对克拉酸的工业化生产起到了一定的促进作用。
高效生产克拉多糖结构大肠杆菌菌株构建

[发明专利]一种提高毕赤酵母碳源转化率的基因工程改进方法-CN202110931490.7有效
发明人： 胡晓清;刘昭君;余克洋;翁星;罗双华;刘敏敏;杨希;王江瑜 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-08-13 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高毕赤酵母碳源转化率的基因工程改进方法，属于基因工程技术领域。本发明在毕赤酵母GS115中同时敲除或沉默表达1,3‑β‑D‑葡聚糖合酶相关基因PAS_chr2‑1_0661和α‑1,2‑甘露糖转移酶相关基因PAS_chr3_0370，使构建的基因工程菌的碳源转化率较原始菌株提高2.23～2.41倍。在同样的发酵条件下，本发明构建的底盘细胞Pichia pastoris GS115ΔPAS_chr3_0370ΔPAS_chr2‑1_0661相比Pichia pastoris GS115消耗的碳源更少，菌体生长速率更快，同时，也不影响外源蛋白的表达量，更适用于高密度发酵。
一种提高酵母碳源转化基因工程改进方法

[发明专利]一种四氢嘧啶产量提高的大肠杆菌的构建与应用-CN202310399252.5在审
发明人：王小元;李莹;张淑嫣;胡晓清;王建莉 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-04-13 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种四氢嘧啶产量提高的大肠杆菌的构建与应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上基因aroG,poxB,pflB,adhE,mscS得到突变菌E.coli MWL009/pFT28‑ectABC‑EclysC*‑aspDH‑ppc3，该菌株在发酵培养基中分批发酵36h后，四氢嘧啶产量为18.28g/L，相比于E.coli MWZ003/pFT28‑ectABC‑EclysC*‑aspDH‑ppc3的四氢嘧啶产量提升了28％；在发酵培养基中补料分批发酵60h后，四氢嘧啶产量为34.27g/L，葡萄糖转化率达到0.34g/g。该研究提供了一种提高大肠杆菌中高产四氢嘧啶的新策略。
一种嘧啶产量提高大肠杆菌构建应用

[发明专利]一种L-谷氨酸产量提高的谷氨酸棒杆菌的构建与应用-CN202210851934.0在审
发明人：王小元;李贺丹;胡晓清;王建莉 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-07-19 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种L‑谷氨酸产量提高的谷氨酸棒杆菌的构建与应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除谷氨酸棒杆菌基因组上海藻糖合成基因treS,treY和otsA基因，得到了L‑谷氨酸产量提升的重组菌株C.glutamicum△SYA，该菌株在发酵培养基中发酵60h的L‑谷氨酸产量为14.75g/L，是出发菌株C.glutamicum ATCC13869的12.5倍，有助于实现L‑谷氨酸的工业化生产。
一种谷氨酸产量提高杆菌构建应用

[发明专利]一种用于生产神经酰胺的毕赤酵母菌株及其构建方法和应用-CN202310291141.2在审
发明人：张目;黄晓东;胡晓清 -专利权人：广州悦荟化妆品有限公司
申请日： 2023-03-23 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种用于生产神经酰胺的毕赤酵母菌株及其构建方法和应用。本发明首次利用毕赤酵母菌株同时过表达lcb1基因、lcb2基因和XP_002490234基因以合成神经酰胺；并且本发明过表达基因的毕赤酵母菌株可以实现高密度培养，解决了毕赤酵母菌株高密度培养时细胞氧化损伤问题，从而提高神经酰胺的产量。经过基因改造后的毕赤酵母菌株产生的神经酰胺总量或者不饱和脂肪酸神经酰胺占比均获提高，其中含饱和脂肪酸的神经酰胺占总脂质2.025％，含不饱和脂肪酸的神经酰胺占0.426％，合计2.451％，比出发菌株提高82.64％；其中含不饱和脂肪酸的神经酰胺占所有神经酰胺比例为17.38％，比出发菌株提高48.55％。
一种用于生产神经酰胺酵母菌株及其构建方法应用

[发明专利]一种高产L-苏氨酸的大肠杆菌的构建及应用-CN202310286663.3在审
发明人：王小元;宫登科;乔君;胡晓清;王建莉 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-03-22 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产L‑苏氨酸的大肠杆菌的构建及应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明在大肠杆菌TWF001基因组中敲除菌毛合成基因簇Ycb，Yad，Yde，Yeh，Yqi，Yra，Yfc，Type1，Yhc和Sfm，得到突变菌TWK021，TWK021菌株在发酵培养基中L‑苏氨酸产量为15.75g/L，比TWF001产量提高了32.4％，并在分批补料发酵中获得了62.7g/L的L‑苏氨酸产量。本发明构建了一株稳定的高产L‑苏氨酸的大肠杆菌，发酵过程中全程不需要抗生素维持质粒存在，提供了一种提高大肠杆菌中L‑苏氨酸产量的新策略。
一种高产苏氨酸大肠杆菌构建应用

[发明专利]一种能提高生产效率的无菌毛大肠杆菌的构建及应用-CN202110053059.7有效
发明人：王小元;乔君;檀昕;任鸿宇;吴铮;胡晓清;李烨 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-01-15 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种能提高生产效率的无菌毛大肠杆菌的构建及应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上菌毛基因簇的64个基因得到突变菌WQM026，该菌株在营养缺乏的培养基中生长变快，菌体总量增多。将PHB和L‑苏氨酸合成的相关基因分别转化到菌株WQM026中，得到的重组菌WQM026/pBHR68和WQM026/pFW01‑thrA*BC‑rhtC可以分别高效合成PHB和L‑苏氨酸。合成的PHB占细胞干重的87.87％，是野生型对照菌的3.44倍。L‑苏氨酸产量为2.49g/L，是野生型对照菌的3.66倍。
一种提高生产效率无菌大肠杆菌构建应用

[发明专利]一种副溶血弧菌类脂A提取纯化与结构分析的方法-CN202211441483.X在审
发明人：王小元;黄丹阳;季帆;孟祥宇;檀昕;胡晓清 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-11-17 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： C12P19/26 文献下载
摘要：一种副溶血弧菌类脂A提取纯化与结构分析的方法。本发明属于类脂A提取领域。本发明的目的是为了解决现有类脂A提取方法不适用于副溶血弧菌以及有机试剂用量大的技术问题。本发明的方法是针对特定的副溶血弧菌开发的游离与非游离类脂A的提取与提纯方法，提取LPS连接类脂A时，加入醋酸钠水解时将pH值调节到2.0‑2.5，与此同时，将磁力搅拌时间增长为2.5h，从而实现了副溶血弧菌LPS连接类脂A的高效提取，此外，提取副溶血弧菌游离类脂A时，本申请创新性的采用极少量的菌体以及少于传统方法约100倍有机试剂(氯仿、甲醇)的量进行副溶血弧菌的游离类脂A的提取，是一种较新且省时省力的提取菌株中游离类脂A的方法。
一种溶血弧菌提取纯化结构分析方法

[发明专利]一种带鼻咽通气道的胃肠镜咬口器-CN202211307174.3在审
发明人：邓利兵;蒋晖;沙勤;周海洲;胡晓清;王静;陈鹏;童兴瑜;程金前;季云晶 -专利权人：复旦大学附属中山医院青浦分院（上海市青浦区中心医院）
申请日： 2022-10-24 - 公布日： 2023-01-06 - 主分类号： A61B1/24 文献下载
摘要：本发明涉及一种带鼻咽通气道的胃肠镜咬口器，设有咬口器主体，所述咬口器主体为咬合壳体和外壳体一体化连接而成；所述咬合壳体为椭圆形筒体，上下两侧分别设有一咬合槽，下方设置一压舌板，中间空心处设置有活瓣，所述活瓣中设有胃镜通道；所述活瓣侧面设有固定弹件，所述固定弹件设有两片，相对着插设在外壳体内，两片固定弹件合在一起后中间有一圆形空缺，所述圆形空缺在固定弹件张开后形成鼻咽通道，能容纳通气管通过；所述通气管由一根粗管和一根细管组成；所述外壳体上设置有一吸引管通孔。本发明不仅能为因舌后坠或呼吸抑制等呼吸道梗阻患者提供氧气，减少氧气泄露，还能方便实施高流量窒息氧合技术，能改善患者氧合，适合临床推广使用。
一种鼻咽通气胃肠口器

[发明专利]一种混合碳源高效发酵生产PHB的工程菌及其应用-CN201910942722.1有效
发明人：王小元;王建莉;马文渐;梁浩;杨惠婷;胡晓清;李烨 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-09-30 - 公布日： 2022-12-13 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种混合碳源高效发酵生产PHB的工程菌及其应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明在大肠杆菌中敲除敲除大肠杆菌基因组上核心糖基因簇的14个基因得到突变菌WJW01，继续敲除大肠杆菌基因组上O‑抗原基因簇的11个基因得到突变菌WJW02，随后将PHB合成的三个基因分别转化到精简菌株WJW02中，并敲除了ptsG基因，使构建的重组菌可以利用木糖和葡萄糖混合碳源合成PHB高达细胞干重的78.4％，是野生型对照菌W3110/pDXW‑8‑phaCAB(1.5％)的6倍，且较WJW02/pDXW‑8‑phaCAB提高50％。
一种混合碳源高效发酵生产 phb 工程及其应用

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