本发明涉及一种高效稳定的细胞表达载体、表达系统及其制备方法、应用,属于基因工程技术领域。本发明中的细胞表达载体包含MAR from the DHFR intron序列,该段序列具有普通MAR序列和内含子的双重功能,能更好的提高CHO细胞中外源蛋白表达水平,由其构建得到的表达载体能驱动目的基因高效、持续、稳定表达,同等条件下,与不含MAR from the DHFR intron序列及包含来自CHO细胞的MAR‑6序列的表达载体相比,本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平,可用于重组蛋白的生产等。