本发明涉及一种基于唾液微生物检测人群是否吸烟的引物对、试剂盒及方法,属于生物信息学技术领域。该试剂盒包括引物对、PCR试剂和阴性对照;引物对包括上游引物和下游引物;上游引物依次由标签序列和上游引物序列组成;下游引物依次由标签序列和下游引物序列组成;上游引物序列如SEQ ID NO:1所示;下游引物序列如SEQ ID NO:2所示;本发明首先采集待检测人的唾液样本,之后提取唾液中的总DNA,接着进行PCR扩增,PCR产物经回收纯化后测序,并OTUs聚类和物种分类分析,之后根据分析结果进行判断。本发明能有效预测人群是否有长期吸烟习惯,检测过程无创,低成本,快速便捷,安全性高,易于推广应用。