本发明公开了一种烟草β‑葡葡糖苷酶相关基因NtBGLU17在调控烟草叶片次生代谢物含量中的应用。NtBGLU17基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，NtBGLU17编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术，构建了用于敲除NtBGLU17基因的CRISPR/Cas9编辑载体，经编辑素材创制和分子检测鉴定后获得了NtBGLU17基因敲除的烟草植株。本发明获得的，NtBGLU17基因敲除的编辑烟草植株，相比于对照烟草植株，成熟期腰叶中次生代谢物含量变化显著。
本发明提供了一种烟草香味基因及其靶向sgRNA和应用，属于烟草育种技术领域。一种烟草香味基因，包括NtBADH2a和/或NtBADH2b基因；所述NtBADH2a基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述NtBADH2b基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。所述烟草香味基因作为作用靶点在改善烟草香味中的应用。鉴于所述烟草香味基因通过负调控影响烟草香味物质含量，本发明还提供了一种靶向烟草香味基因的sgRNA或基因编辑系统在构建富含香味物质的烟草品系中的应用。可见，本发明提供的烟草香味基因为烟草育种提供了有效靶点。
本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一个烟草NtOEE1基因及其在调控茎叶夹角和株高中的应用。所述烟草NtOEE1基因，包括3141bp，碱基序列如SEQ ID NO.1所示。所述烟草NtOEE1基因，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明通过对NtOEE1基因的深入研究，对于栽培烟草株型调控具有重要的应用价值。
本发明公开了一种烟草叶绿体相关蛋白基因NtTHF1及其应用,该烟草叶绿体相关蛋白基因NtTHF1来源于烟草，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，包括894bp个碱基。本申请通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术，构建了用于敲除NtTHF1基因的CRISPR/Cas9编辑载体，经遗传转化后获得了基因编辑突变体植株。本发明通过在正常条件下，现蕾期、成熟期进行NtTHF1基因编辑植株与对照植株农艺性状调查，NtTHF1基因编辑植株中株高、腰叶长及腰叶宽均低于对照植株中的，成熟期精氨酸、赖氨酸及脯氨酸含量均低于对照。综上所述，利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术敲除NtTHF1基因获得影响植株生长发育的基因编辑植株，这为烟草叶绿体相关蛋白研究及烟草生长发育研究提供遗传材料和理论依据。
本发明公开了一种烟草钙离子感受器相关的基因及其应用，该基因命名为烟草NtCBL4基因，其核苷酸序列为：SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经取代和/或缺失和/或增加一个或多个核苷酸且具有相同功能的核苷酸序列；在严格条件下与SEQ ID NO.1所示序列杂交的核苷酸序列，严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜。本发明可通过调节NtCBL4基因表达水平控制烟草的耐盐性，通过基因工程手段获得NtCBL4基因不同表达水平、不同耐盐性的转基因作物；过量表达NtCBL4能够降低烟草对高盐的耐受性。
本发明公开了一种烟草生长素响应转录因子ARF2相关的基因及其应用，烟草生长素响应转录因子ARF2相关的基因为两个来源于烟草的基因，命名为NtARF2‑1和NtARF2‑2，核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示。本发明通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术，构建了用于敲除2个NtARF2基因的CRISPR/Cas9编辑载体，经遗传转化后获得了双突arf2‑1/arf2‑2突变体编辑植株。通过在MS条件下培养与正常条件下栽培，发现双突arf2‑1/arf2‑2基因编辑植株的根系发育与生长均明显低于对照植株，为研究烟草根系发育及生长发育基因功能提供遗传材料和理论依据。
