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[发明专利]一种临床级干细胞无血清培养基-CN201911099510.8有效
发明人：孔德照;陈杰;方松刚 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-11-12 - 公布日： 2022-07-15 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开一种临床级干细胞无血清培养基。本发明的培养基以L‑DMEM、IMDM、DMEM‑F12或α‑MEM、mTeSRTM1培养基、E8培养基和KSR条件培养基等为基础培养基，去除肌醇、亚油酸等脂类物质和合成脂类物质成分，同时含有以下添加成分：聚乙烯醇、骨形态发生蛋白BMP‑4、维生素C、维甲酸、烟酰胺、阿奇霉素。该培养基成分明确，质量可控，不含动物血清成分，可以培养包括多能干细胞和专能干细胞在内各种干细胞，多次传代后可以维持干细胞的“干性”不产生分化的能力。
一种临床干细胞血清培养基

[发明专利]一种封闭抗体减少或缺失引起的习惯性流产治疗试剂盒-CN202110367595.4有效
发明人：陈杰;孔德照;方松刚 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2021-04-06 - 公布日： 2022-05-24 - 主分类号： G01N33/53 文献下载
摘要：不明原因习惯性流产是一种较难治愈的不育症，其中封闭抗体不足或缺失是发生习惯性流产的主要原因。根据免疫学的原理诞生了习惯性流产的主动免疫法，主动免疫法是利用患者配偶的外周血中的淋巴细胞刺激患者免疫系统引发封闭抗体的产生，使孕后胎盘得到保护。一种封闭抗体不足或缺失引起的习惯性流产治疗试剂盒，采用主动免疫法的原理治疗习惯性流产，利用试剂盒中的临床级医用试剂和特制淋巴细胞分离无菌装置，能够简便快捷、安全无菌的分离患者配偶外周血中的淋巴细胞，再进行患者上臂皮下注射，每次注射的淋巴细胞浓度为20～30*109/L,注射3～4个皮丘点，每点0.25ml，间隔3周一次，4次为一个疗程。经过多年临床研究，主动免疫法治疗习惯性流产成功率83.72%，如果联合其他治疗方法能更加提高治疗成功率。
一种封闭抗体减少缺失引起习惯性流产治疗试剂盒

[发明专利]PRP创面生肌膏-CN201910256032.0在审
发明人： 方松刚 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-04-01 - 公布日： 2020-10-30 - 主分类号： A61K36/889 文献下载
摘要：富血小板血浆（PRP）是一种将全血离心得到的一种富含血小板的血浆浓缩物，含有大量的生长因子，具有愈合伤口、促进组织再生、软骨修复的功效，在临床上已经得到广泛应用。现有的治疗烧伤、烫伤、刀伤、难愈合性创面、手术创面药物主要是一些纯中药膏方，这些膏方多多少少会存在治愈率不高、留疤痕等缺陷。本专利将PRP与中药相结合，得到一种中西药结合的创面生肌膏，对烧伤、烫伤、刀伤、难愈合性创面、手术创面有更好的疗效。
prp 创面生肌膏

[发明专利]一种组合过滤式中药粉碎机-CN201911059341.5在审
发明人： 方松刚;陈杰 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-11-01 - 公布日： 2020-04-17 - 主分类号： B02C18/10 文献下载
摘要：本发明所述的一种组合式过滤粉碎机，主要应用于中药材以及五谷杂粮的粉碎过滤。是针对现有现有粉碎机粉碎效率低和不能过滤等问题而设计的。本发明所述的组合式过滤粉碎机有两个主要特点：采用三台电机和三个粉碎刀头组成一个高效的粉碎组合；粉碎室底部装有不锈钢筛网，并且筛网中心处有震荡棒，可以在粉碎的同时进行过滤，在堵塞情况下还可以开启震荡棒，缓解堵塞。
一种组合过滤中药粉碎机

[发明专利]一种造血干细胞体外扩增培养体系和方法-CN201911111383.9在审
发明人：陈杰;孔德照;方松刚 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-11-14 - 公布日： 2020-04-03 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明公开一种造血干细胞体外扩增培养体系和方法，采用明胶、胶原蛋白、层粘连蛋白、纤连蛋白中的一种或几种组合提前进行包被，以无血清培养基为基础培养基，同时添加聚乙烯醇、地塞米松、烟酰胺、肾上腺素类物质，以及细胞因子TPO（促血小板生成素）和SCF(干细胞生长因子）组合。与传统培养体系和方法相比，用本发明的培养体系和方法，能高效扩增CD34+细胞的数量，在体外培养4周左右细胞数量可以扩增200至1000倍，并长期保持活性的造血干细胞。本发明可以提供大量的临床用造血干细胞，有效解决临床造血干细胞应用不足的问题。
一种造血干细胞体外扩增培养体系方法

[发明专利]一种悬浮细胞培养中去除死细胞的方法-CN201911107953.7在审
发明人： 方松刚;陈杰 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-11-13 - 公布日： 2020-03-24 - 主分类号： C12N5/00 文献下载
摘要：本发明专利主要涉及一种悬浮细胞培养中死细胞的去除方法，得到活性更高的细胞。本专利采用梯度离心法进行分离死细胞和死细胞碎片。分离死细胞的原理是：细胞死亡后，细胞膜通透性增大，细胞内水分流失并萎缩，最终细胞膜破裂。在这个细胞凋亡的过程中，细胞的密度会越来越大，死细胞和死细胞碎片会比正常活细胞的密度要大。将细胞混合液加入到密度介于死细胞和活细胞密度之间的淋巴细胞分离液中，然后离心这样就可以将死细胞和活细胞分离开来。本专利中去除悬浮细胞中死细胞的方法，较传统的离心法分离更加彻底，同时也减少了活细胞的损伤。
一种悬浮细胞培养去除细胞方法

[发明专利]一种含中药成分的指甲油-CN201911119102.4在审
发明人： 方松刚;陈杰 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-11-15 - 公布日： 2020-03-24 - 主分类号： A61K8/34 文献下载
摘要：本发明涉及一种含中药成分的无毒无害指甲油，属于化妆品行业。很多中草药不但可以入药，而且还可以提炼颜料物质。将这些从中草药中提炼的颜料物质与无毒的水溶性增稠剂结合就可以制备一种无毒无害的含中药成分的指甲油。本发明的指甲油按重量份数包含以下成分：丙烯酸树脂1‑5份，甘油15‑20份，丙二醇10‑15份，蜂蜜1‑5份，香精1‑2份，珠光粉1份，中药提取液50‑60份。其中中药提取液有三种：茜草红花提取液；桑葚树莓提取液；野菊橘皮提取液。
一种中药成分指甲油

[发明专利]一种人外周血单个核细胞冻存方法-CN201911109709.4在审
发明人：陈杰;梁洋泉;方松刚 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-11-14 - 公布日： 2020-03-17 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明提供一种人外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)冻存液及PBMC冻存方法，包括DMSO、右旋糖酐、海藻糖、基础培养基、人血白蛋白或自体血浆。PBMC冻存液能有效保护PBMC免受冷冻损伤，安全性高，对细胞的损伤小。在高密度PBMC的前提下，通过程序性降温盒进行降温，隔夜转移储存液氮中1个月、3个月、6个月、12个月，然后复苏PMBC进行免疫细胞（CIK）的诱导培养，和新鲜的PBMC相比冻存的高密度PBMC的增殖速率、细胞表型无明显差异。
一种人外周血单个细胞方法

[发明专利]一种新型脂肪干细胞培养方法-CN201911097326.X在审
发明人：陈杰;梁洋泉;方松刚 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-11-12 - 公布日： 2020-03-06 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种新型脂肪干细胞培养方法，主要应用脂肪干细胞的原代培养，属于细胞工程技术领域，操作步骤包括：离心法去除上层油脂；等体积加入0.9%生理盐水，使用物理破碎脂肪组织，使脂肪干细胞和脂肪细胞成为单个细胞或细小细胞团；使用200目筛网过滤残渣，去除大颗粒脂肪和脂肪细胞，获取脂肪干细胞。与现有技术相比，本发明通过物理破碎脂肪组织，然后进行200目筛网过滤，使脂肪细胞和脂肪干细胞分离。然后将其收集后培养可直接得到原代脂肪干细胞，制备方法简单，成本较低，仅需消耗少量组织，且不会通过胶原酶消化而破坏脂肪干细胞。
一种新型脂肪干细胞培养方法

[发明专利]一种链式NK细胞的培养方法-CN201911008852.4在审
发明人：孔德照;陈杰;方松刚 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-10-23 - 公布日： 2020-01-03 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开一种链式NK细胞的扩增培养方法，包括如下步骤：培养NK细胞前，先提前用单克隆抗体CD56、CD16，以及细胞因子IL‑21、IL‑15包被培养瓶/皿，培养当天收集人外周血、脐血、骨髓等来源的单个核细胞，采用自体细胞饲养层与因子组合2步链式激活，以后根据细胞生长情况及时补液并于第5天添加因子组合再次激活。本发明在前5天内期可以获得高基数活化的高表达CD3—CD56+的NK细胞，通过14天的扩增培养可以获得大量高纯度的自然杀伤NK细胞，能够满足临床治疗肿瘤的需求。
扩增培养链式激活临床治疗肿瘤单个核细胞单克隆抗体人外周血细胞生长细胞因子自然杀伤自体细胞高表达高纯度高基数培养瓶饲养层包被补液活化脐血骨髓

[发明专利]一种自体富血小板血浆分离制备装置-CN201910960687.6在审
发明人： 方松刚;陈杰 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-10-11 - 公布日： 2020-01-03 - 主分类号： B04B7/00 文献下载
摘要：为了提高富血小板血浆（PRP）的制备效率和血小板回收率，本专利设计一种新型的PRP分离制备装置，该装置分为三部分，从上之下分别为PRP仓室部件、全血仓室部件和底盖，相邻部件重合部分有螺纹结构，可以相互转动。该装置通过两步离心法，可以高效地分离出全血中的富血小板血浆，血小板回收率在60%以上。
富血小板血浆血小板回收率仓室全血螺纹结构相邻部件制备装置专利设计离心法重合底盖制备转动

[发明专利]一种自体毛囊保存液-CN201910256035.4在审
发明人： 方松刚 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-04-01 - 公布日： 2019-09-10 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：我国脱发的患者呈逐年增长的趋势，需要毛发移植的患者也是越来越多。目前现有的毛发移植术都是以毛囊为移植单位，又称自体毛囊移植术。由于毛囊单位及其微小，在提取和保存毛囊的时候，极易存在着毛囊细胞受损存活率不高的现象。本专发明了一种自体毛囊保存液，用于保存需要移植的毛囊，保存于自体毛囊保存液中的毛囊可以提高毛囊细胞的在体外的存活率，同时也保障了毛囊移植的成功率。自体毛囊保存液来源于自体外周血，通过在无菌实验室经过两步离心法得到的一种富含多种细胞因子的自体血浆。
毛囊自体保存液毛囊细胞存活率保存移植毛发移植术自体外周血毛发移植毛囊单位毛囊移植细胞因子自体血浆脱发离心法移植术富含体外无菌成功率受损

[发明专利]一种脐带中透明质酸的提取方法-CN201910195902.8在审
发明人： 方松刚 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-03-15 - 公布日： 2019-07-26 - 主分类号： C08B37/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种人脐带中透明质酸的提取方法，主要包括了原材料材料的处理和透明质酸的提取步骤。人脐带中透明质酸的提取步骤为：将清洗干净的脐带用剪刀充分剪碎，剪碎的脐带组织加入6‑7倍体积的蒸馏水倒入组织匀浆机中，充分打碎成匀浆状；用纱布过滤；得到的滤液加入4%枯草杆菌蛋白酶，60℃酶解4h;酶解完后加入等体积的氯仿和正丁醇（氯仿：正丁醇=3:1），搅拌3小时，然后静置分层，吸出上层水相。将上层水相转移再加入2倍体积的95%乙醇，静置8h，滤纸过滤得到透明质酸的初品。得到的透明质酸初品加入5倍体积的蒸馏水溶解，溶解后加入到DEAE‑SephadexA‑25凝胶层析柱中，然后用0.95mol/LnaCL进行洗脱，将得到的洗脱液放入真空干燥剂干燥得到成品。
透明质酸人脐带正丁醇剪碎氯仿酶解脐带蒸馏水枯草杆菌蛋白酶上层凝胶层析柱蒸馏水溶解组织匀浆机静置分层滤纸过滤脐带组织纱布过滤干燥剂洗脱液匀浆状放入吸出洗脱乙醇剪刀打碎清洗溶解

[发明专利]磁珠法培养贴壁细胞-CN201910022715.X在审
发明人： 方松刚 -专利权人：武汉济源高科技有限公司
申请日： 2019-01-10 - 公布日： 2019-04-16 - 主分类号： C12N5/00 文献下载
摘要：本专利主要描述的是一种新型的贴壁细胞培养方法。这种新型的贴壁细胞培养方法依赖于一种表面经过包被液处理的微型磁珠（50nm），将磁珠和细胞混合于液体培养基中后，细胞将很快贴附于磁珠表面，这样将大大增大细胞的培养面积。同时磁珠具有磁吸附的特性，通过外加磁场可以方便快捷地将磁珠和培养基分离开来，便于细胞的传代和收集。本专利中的贴壁细胞培养方法可以广泛应用于干细胞、成纤维细胞、表皮细胞、DC细胞以及其它贴壁细胞的科研和工业化生产。
贴壁细胞培养细胞磁珠传代成纤维细胞液体培养基表皮细胞磁珠表面培养贴壁贴壁细胞外加磁场微型磁珠培养基包被液磁吸附磁珠法干细胞贴附科研应用

[发明专利]一种火把梨耐盐基因PpGST及其应用-CN201010100346.0无效
发明人：刘迪秋;王继磊;葛锋;方松刚;李文娴;田荣欢;王光勇 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2010-01-22 - 公布日： 2010-06-23 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明是一种火把梨耐盐基因PpGST及应用。PpGST基因具有SEQ ID所述的碱基序列，编码谷胱甘肽S-转移酶。本发明通过功能基因组学相关技术证实PpGST基因具有提高植物耐盐胁迫的功能。将本发明耐盐基因PpGST构建到植物表达载体上并转入烟草中过量表达，产生的转基因烟草具有很强的耐盐活性。
一种火把梨耐盐基因 ppgst 及其应用

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