本发明公开了一种重组精氨酸脱亚胺酶突变体、其制备方法及应用。本发明通过定向进化，对重组精氨酸脱亚胺酶基因(氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示)进行改造，从2万个克隆中筛选得到有益突变，进一步通过组合突变得到最优突变体M15。所述最优突变体M15的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明制备的重组精氨酸脱亚胺酶突变体的酶活性大幅提高，催化效率大幅增加。可用于制备抗肿瘤(抗肝癌、黑色素瘤、前列腺癌)药物。
本发明公开了一种可用于孤核受体活性调节剂筛选的双荧光素酶报告基因质粒，为含受DR1的萤火虫荧光素酶以及内参海肾荧光素酶嵌合质粒(p‑TK‑(DR1)3‑Fluc‑hRluc)，其构建方法是将如SEQ ID NO.1的片段插入到商品化质粒pmirGLO经NheI/BglII双酶切后得到带有hRluc的骨架质粒中。通过将该质粒与孤核受体过表达质粒共转染细胞，利用双荧光素酶活力检测可实现孤核受体活性调节剂的高效筛选，方法操作简单，灵敏度高、专属性强。
