本发明公开了一种腺嘌呤脱氨酶、包含其的碱基编辑系统及其应用。所述腺嘌呤脱氨酶相比于如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有选自第27位、第28位、第30位、第142位和第144位的一种或多种氨基酸差异。本发明的腺嘌呤脱氨酶能够同时实现腺嘌呤脱氨酶和胞嘧啶脱氨酶的原有功能,发挥双碱基突变作用,提供了更丰富的编辑产物类型,减小了构建体的体积,有效解决由于构建体的体积过大导致的递送限制的问题,将极大促进其在基因编辑、临床基因治疗、遗传筛选、谱系示踪、分子进化、作物遗传育种等方面的应用。
本发明公开了一种腺嘌呤脱氨酶及其应用。所述腺嘌呤脱氨酶相比于如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有氨基酸差异,所述氨基酸差异位于第46位。本发明的腺嘌呤脱氨酶完全避免了腺嘌呤编辑,并极大提高了对胞嘧啶的编辑,实现单个碱基C‑G到T‑A编辑。包含该腺嘌呤脱氨酶的碱基编辑器可高精度、高效、安全地介导胞嘧啶编辑,indels降低、体积更小,展示出较高的编辑活性和较低的脱靶事件,因此具备极高的安全性,将极大促进其在基因编辑领域的广泛应用。
本发明公开了一种编辑碱基的融合蛋白及其应用。所述融合蛋白的N端至C端依次包括TadA8e片段和Cas9n片段,所述TadA8e片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,所述Cas9n片段为具有单链切割活性的Cas9蛋白片段;所述融合蛋白还包括Rad51片段,所述Rad51片段与所述Cas9n片段相邻并位于所述Cas9n片段的N端或C端;所述Rad51片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的编辑腺嘌呤的融合蛋白可以有效提高近PAM区的编辑效率,并拓宽了编辑窗口;本发明的编辑腺嘌呤和胞嘧啶的融合蛋白有效提高了A/C同时编辑效率。