本发明公开了一种异丁香酚单加氧酶突变体IEM‑F305W‑L470E、工程菌及应用，属于生物技术领域。异丁香酚单加氧酶基因来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。所述突变体是在SEQ ID NO：2所示氨基酸序列第305位、第470位发生单突变或多位点突变获得的。本发明构建的异丁香酚单加氧酶并构建工程菌株，筛选到的突变体酶活较原始最高提高634.6％，并用于对羟基苯甲醛的酶法合成，产物浓度最高可达2.48g/L，转化率最大可达81.3％。
本发明公开了一种异丁香酚单加氧酶突变体、工程菌及应用，属于生物技术领域。异丁香酚单加氧酶基因来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。所述突变体是在SEQ ID NO：2所示氨基酸序列59位、第216位、第304位发生单突变或多位点突变获得的。本发明构建的异丁香酚单加氧酶并构建工程菌株，筛选到的突变体酶活较原始最高提高445.7％，并用于对羟基苯甲醛的酶法合成，产物浓度最高可达1.27g/L，转化率最大可达41.6％。
本发明公开了一种过氧化氢酶突变体及其应用，所述突变体至少在初始型过氧化氢酶氨基酸序列的下列位置之一发生了突变：第67位异亮氨酸突变为苯丙氨酸、第102位蛋氨酸突变为亮氨酸、第200位缬氨酸突变为苯丙氨酸、第251位丙氨酸突变为丝氨酸，所述初始型过氧化氢酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。与初始过氧化氢酶BmCAT相比，过氧化氢酶突变体氨基酸序列发生了替换，形成的突变体显著提高了催化过氧化氢的能力。在利用乳酸氧化酶生物合成丙酮酸的过程中，采用表达该过氧化氢酶突变体的全细胞催化消除反应过程中产生的过氧化氢，酶的用量少，过氧化氢的消除率显著提高，产物丙酮酸的摩尔转化率最高达为99.7％，具有很高的工业化应用前景。
