本发明涉及一种用于核酸斑点杂交法检测马铃薯A病毒的探针、其制备方法及试剂盒,属于马铃薯病毒检测技术领域。为解决现有核酸斑点杂交法检测马铃薯A病毒时使用的探针产量低、成本高的问题,本发明提供了一种用于核酸斑点杂交法检测马铃薯A病毒的探针,其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明探针只在反向引物5’端标记有地高辛,保证显色效果的同时降低了探针对保存条件的要求。本发明的制备方法提高了探针产量,降低了探针的制备成本,灵敏度更高。本发明提供的检测试剂盒,简化了检测程序,对检测设备的要求更低,检测场所的适应性更广,更便于马铃薯A病毒的田间检测和口岸检疫,能够显著提高马铃薯A病毒的检测效率。