本发明公开了吡咯赖氨酰‑tRNA合成酶突变体及其应用，该突变体由SEQ ID NO.3所示氨基酸序列在31位、56位、100位、311位和313位突变所得。本发明对MbPylRS序列进行改造，提高tRNA的识别速率，进而提高非天然氨基酸的引入效率。经验证，针对不同的非天然氨基酸MbPylRS的突变比MmPylRS具有更高的结合效率，经改造后的MbPylRS对十种非天然氨基酸的引入效率较MbPylRS(N311A/C313A)提高了3‑6倍，并成功将非天然氨基酸用于GFP蛋白的表达。本发明解决了非天然氨基酸引入效率低的问题，方便推广应用。
本发明涉及一种生物酶催化制备布瓦西坦中间体化合物的方法，所述布瓦西坦中间体化合物结构如式(I)所示，所述方法以化合物(II)为底物，以N‑乙基马来酰亚胺还原酶为催化剂，经不对称加氢反应制得到化合物(I)；所述N‑乙基马来酰亚胺还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.6所示。本发明的有益效果主要体现在：(1)本发明选择化合物(II)作为布瓦西塔合成的手性中间体，其易于制备，且酶催化的加氢反应速率快，转化率高，易于进行下一步反应；(2)本发明使用采用N‑乙基马来酰亚胺还原酶shiNEMR、camNEMR、cfrNEMR，可实现一步法的高效率和高对映体选择性生产化合物I，底物转化率99％，对映体选择98％。
