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[发明专利]一种芸薹根肿菌分泌蛋白的鉴定方法-CN201910357429.9有效
发明人：余方伟;王神云;李建斌;张伟;唐君;王红;于利 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2019-04-29 - 公布日： 2023-06-13 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种芸薹根肿菌分泌蛋白的鉴定方法，包括预测芸薹根肿菌分泌蛋白的信号肽序列；构建芸薹根肿菌分泌蛋白载体：提取感染根肿病的拟南芥根部RNA，反转录成cDNA，作为PCR扩增模板，利用高保真酶KOD‑FX NEO扩增预测信号肽序列；构建pSUC2‑PbCe1；酵母转化；酵母转化子的PCR验证。本发明提供的芸薹根肿菌分泌蛋白的鉴定方法，可以为芸薹根肿菌的分泌蛋白鉴定以及相关的后续研究提供强有力的技术支持。
一种芸薹根肿菌分泌蛋白鉴定方法

[发明专利]一种甘蓝苗期黑斑病抗性的室内鉴定方法-CN202310075654.X在审
发明人： 王神云;刘志刚;余方伟;张伟;李建斌;于利 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2023-02-07 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12Q1/18 文献下载
摘要：本发明公开了一种甘蓝苗期黑斑病抗性的室内鉴定方法，属于植物抗性鉴定技术领域。本发明公开的一种甘蓝苗期黑斑病抗性的室内鉴定方法，包括甘蓝幼苗的准备；孢子悬浮液的制备；病原菌的接种；接种后的管理；调查评价。按本发明提供的方法操作时，接种后的甘蓝苗发病率稳定，重复间差异小，仅调查特定叶片的发病情况并计算病情指数，为抗性评价提供了便利。本发明在甘蓝苗期黑斑病抗性鉴定方面有较大的应用前景。
一种甘蓝苗期黑斑病抗性室内鉴定方法

[发明专利]一种适合双行自动移栽机自动取苗的甘蓝穴盘育苗方法-CN202211259513.5在审
发明人：李建斌;王神云;余方伟;张伟;于利 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2022-10-14 - 公布日： 2022-12-20 - 主分类号： A01G22/15 文献下载
摘要：本发明公开了一种适合双行自动移栽机自动取苗的甘蓝穴盘育苗方法。该方法包括：(1)育苗前准备，(2)播种，(3)苗床管理，(4)病虫害防治，(5)壮苗标准。通过该育苗方法，育成的穴盘苗符合双行自动移栽机要求，保障采用双行自动移栽机移栽，取苗成功率≥95％，苗钵损伤率≤2％，实现高效低损甘蓝自动化移栽。
一种适合双行自动移栽甘蓝育苗方法

[发明专利]一种甘蓝营养品质综合评价的方法及其应用-CN202210851246.4在审
发明人：张伟;王神云;余方伟;李建斌;于利 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2022-07-19 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： G06Q10/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种甘蓝营养品质综合评价的方法及其应用。该方法通过测定甘蓝种质资源的6项营养品质指标，通过主成分分析法构建3个主成分函数表达式Y1、Y2、Y3和营养品质综合评价模型Y综合，Y综合数值越大，甘蓝营养品质越高；建立甘蓝营养品质5级评价标准，并对待测甘蓝营养品质进行综合评价与等级划分。本发明采用主成分分析法建立甘蓝营养品质综合评价体系，能够客观、公正、准确、科学的判断甘蓝营养品质的优劣，克服了感官评价易受主观因素影响的局限性，为高营养品质甘蓝新品种的选育、种植以及采后挑选分级提供更多的借鉴和参考。
一种甘蓝营养品质综合评价方法及其应用

[发明专利]一种LAMP检测芸薹生链格孢的引物及方法-CN202010941603.7有效
发明人：余方伟;王神云;张伟;李建斌;于利 -专利权人：江苏省农业科学院;南京利华农业科技有限公司
申请日： 2020-09-09 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开了一种LAMP检测芸薹生链格孢的引物及方法，属于分子生物学技术领域。本发明公开的一种LAMP检测芸薹生链格孢的方法，包括提取芸薹生链格孢基因组DNA；以基因组DNA为模板，利用引物进行LAMP扩增；LAMP产物检测：在反应结束后，直接观察反应液颜色变化；或者通过琼脂糖凝胶电泳检测。本发明公开的一种LAMP检测芸薹生链格孢的引物及方法，特异性强，灵敏度高；所用设备简单、操作简便、鉴定方便；且能实现快速、高效扩增。
一种 lamp 检测芸薹生链格孢引物方法

[发明专利]一种直接PCR法及其在甘蓝杂交种遗传育种中的应用-CN201811203531.5有效
发明人：张伟;李建斌;王神云;余方伟;于利;唐君;王红 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2018-10-16 - 公布日： 2021-08-10 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：本发明公开了一种直接PCR法及其在甘蓝杂交种遗传育种中的应用。本发明所提供的直接PCR扩增方法是将甘蓝种子发芽4‑5天后取下胚轴直接作为模板，采用预混抗Taq DNA聚合酶抗体的DNA聚合酶通过热启动法进行PCR扩增的方法。本发明所提供的直接PCR扩增方法简单、快速、实用性强，获得的PCR检测结果准确、灵敏度高、特异性强，并且与传统的将种子发芽后取幼嫩叶片进行DNA的提取和PCR检测的方法相比，避免了提取DNA的繁杂步骤，大大地减少了检测成本和检测时间。本发明在甘蓝“苏甘20”杂交种遗传纯度鉴定方面具有很大的应用前景。
一种直接 pcr 及其甘蓝杂交种遗传育种中的应用

[发明专利]一种利用CRISPR/Cas9定向编辑结球甘蓝基因的方法及应用-CN202010843518.7在审
发明人： 王神云;余方伟;王红;张伟;李建斌;于利 -专利权人：江苏省农业科学院;南京利华农业科技有限公司
申请日： 2020-08-20 - 公布日： 2020-12-11 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用CRISPR/Cas9定向编辑结球甘蓝基因的方法及应用，属于生物技术领域。该方法包括以结球甘蓝BoGASA基因序列为参照设计sgRNA、构建BoGASA基因的sgRNA载体、重组质粒转化农杆菌、农杆菌介导结球甘蓝带柄子叶遗传转化及转化植株的分子检测，在此基础上建立了一套完整的结球甘蓝基因编辑技术体系，对于结球甘蓝反向遗传学研究的开展和其他十字花科植物基因功能解析具有重要意义。
一种利用 crispr cas9 定向编辑甘蓝基因方法应用

[发明专利]马蔺叶肉原生质体及其制备方法-CN201811566917.2在审
发明人：唐君;常有宏;李建斌;于利;王神云;余方伟 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2018-12-20 - 公布日： 2019-02-22 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种马蔺叶肉原生质体及其制备方法，通过马蔺材料的前处理和质壁分离处理，利用纤维素酶、离析酶和果胶酶组合酶解马蔺叶肉组织，有效实现了马蔺原生质体的制备，克服了马蔺原生质体难以游离的技术瓶颈，有效建立了一种马蔺叶肉原生质体的高效制备方法。本发明为实现马蔺快速遗传转化，基因瞬时表达研究等提供了一种有效的操作品台，为建立马蔺细胞工程技术体系进行马蔺原生质体培养、原生质体融合、原生体遗传转化、基因瞬时表达研究等提供了技术支撑。
马蔺叶肉原生质体制备瞬时表达遗传转化原生质体细胞工程技术原生质体培养原生质体融合高效制备技术瓶颈技术支撑纤维素酶叶肉组织有效建立有效实现质壁分离组合酶解果胶酶离析酶前处理原生体基因游离研究作品

[发明专利]一种提高结球甘蓝低出胚基因型小孢子胚胎率发生的方法-CN201711462427.3在审
发明人： 王神云;戴忠良;李建斌;王红;于利;余方伟;唐君;秦文斌;山溪 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2017-12-28 - 公布日： 2018-06-15 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高结球甘蓝低出胚基因型小孢子胚胎发生率的方法,将芥菜、小白菜无菌花药与结球甘蓝小孢子混合悬浮液共同培养,培养得到的胚状体在初期即可确定是结球甘蓝的胚状体,因为结球甘蓝小孢子是游离状态的,而芥菜、小白菜小孢子在花药中,因此在再生植株移栽时不需要对小孢子植株群体的芥菜、小白菜植株进行区别鉴定,从而减少了工作量,从而提高结球甘蓝低出胚基因型小孢子出胚效率。 1
结球甘蓝小孢子小白菜芥菜基因型胚状体花药混合悬浮液胚胎发生率小孢子植株无菌花药游离状态再生植株植株移栽工作量胚胎群体

[发明专利]一种牛心型水果甘蓝的选育方法-CN201710941338.0在审
发明人：李建斌;余方伟;王神云;于利;唐君;王红;张伟;江蛟 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2017-10-10 - 公布日： 2018-01-09 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本发明提供一种牛心型水果甘蓝的选育方法，具体涉及植物新品种选育技术领域，包括选种，杂交母本的选择，将S1中的C0204与C0209的基因聚合，经若干代自交，选育出自交不亲和系B0309‑5‑1‑2‑2‑9‑16为母本；杂交父本的选择，将S1中的C0307与C0508杂交，经若干代自交，选育出自交不亲和系B0313‑3‑2‑4‑5‑3‑1为父本；杂交后代选育，将S1中的杂交母本和S3中的杂交父本进行杂交组合，鉴定试验，获得新品种，通过组合力观察及经济性状鉴定，选择优势组合；品比试验，得到甘蓝新品种。本发明具有选育甘蓝早熟，叶球球型美、口感鲜嫩清甜、适宜生、熟食，抗病性强，丰产性好，抗性强等优点。
种牛水果甘蓝选育方法

[发明专利]一种提高结球甘蓝离体再生效率的组织培养方法-CN201310089116.2有效
发明人：郑子松;王红;于利;刘晓宏;李建斌;王神云 -专利权人：江苏省江蔬种苗科技有限公司;江苏省农业科学院
申请日： 2013-03-20 - 公布日： 2013-06-05 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高结球甘蓝离体再生效率的组织培养方法，先取再生诱导率高的外植体；用次氯酸钠进行灭菌；嫩叶在诱导培养基上先进行16-20h的暗培养，再进行光培养；带腋芽的嫩茎段在诱导培养基上直接进行光培养；将诱导出的芽或丛生芽，转接在增殖培养基上，进行继代增殖；取生长健壮的单芽进行生根培养；生根后在室温下去掉封口膜进行练苗，然后把根部培养基清洗掉后，移栽在准备好的穴盘里。本发明解决不同外植体消毒时间的问题，解决了在结球甘蓝离体再生诱导过程中再生系数低的问题。本发明从消毒时间，外植体取材部位、不同激素配比方面建立了结球甘蓝最为高效的再生体系，为结球甘蓝种质资源的保存和开展结球甘蓝基因工程育种奠定基础。
一种提高甘蓝再生效率组织培养方法

[发明专利]一种草莓菱角水旱轮作栽培方法-CN201210402126.2无效
发明人：李建斌;马红松;马红旗;王神云;马其君;王红;于利 -专利权人：南京绿星农业科技有限公司;江苏省农业科学院
申请日： 2012-10-22 - 公布日： 2013-01-30 - 主分类号： A01G1/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种草莓菱角水旱轮作消除作物连作障碍的栽培方法。3月上旬，利用覆盖塑料薄膜的日光暖式大棚，四周筑梗，以有机肥作基肥，上水进行耕翻理平，形成浅水菱角育苗池；采收草莓，对田块进行耕翻理平，形成平畦；浅水菱角一般在播种后45天左右进行定植，将其移栽到整理好的草莓地块，将其插入土中定植；采收菱角梗、菱角，采收后施入有机肥或发酵好的农家肥作为基肥，耕翻起垄，移植草莓苗，正常田间管理，采收草莓。以设施草莓为农业生产主体，种植菱角为辅，实现水旱轮作，一方面延缓或消除由于设施草莓块连年种植草莓所造成的土壤酸化、盐化、养分失衡、土传病虫害严重等连作障碍，另一方面提高利用率和丰富消费者菜篮子，进一步提高农业生产效益。
一种草莓菱角水旱轮作栽培方法

[发明专利]一种甘蓝漂浮育苗的方法-CN201210414727.5无效
发明人： 王神云;刘勇;李建斌;王红;于利 -专利权人：江苏省农业科学院;江苏康润农业科技发展有限公司
申请日： 2012-10-26 - 公布日： 2013-01-16 - 主分类号： A01G1/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种甘蓝育苗的方法，在避雨棚中采用人工配制的基质培育甘蓝苗，避免了土壤传播的病、虫、杂草危害，彻底摆脱了由于人为难以控制的土壤理化性质方面的缺陷对甘蓝苗造成的各种影响，保证了甘蓝苗的正常生长，可较好地提供甘蓝苗生长所需的营养、温度、水分、光照环境条件，避免了环境条件剧烈变化对育苗过程产生的不良影响，保证了甘蓝苗培育的顺利进行，实现了甘蓝育苗的商品化和集约化规模生产；可在短期内培育出大批量整齐一致、清秀无病的健壮甘蓝苗，缩短了育苗期，增加移栽苗的整齐度，保证了连片区内甘蓝苗可在最佳节令内集中移栽，提高了甘蓝株生长的一致性和均匀性，为甘蓝均衡、高效生产打下了良好基础。
一种甘蓝漂浮育苗方法

[发明专利]原生质体不对称融合制备抗霜霉结球甘蓝新种质的方法-CN201110074018.2有效
发明人： 王神云;刘凡;王红;宗梅;李建斌 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2011-03-28 - 公布日： 2011-09-14 - 主分类号： C12N15/05 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过原生质体不对称融合技术创制抗霜霉病结球甘蓝新种质的途径，解决目前生产上基本没有对十字花科霜霉菌高抗甚至免疫的结球甘蓝品种，以及克服远源杂交不亲和和基因工程技术难度大、投资高等问题。一种原生质体不对称融合制备抗霜霉结球甘蓝新种质的方法，其特征在于携带抗霜霉病基因的抱子甘蓝为供体，供体的原生质体经过UV射线处理；对霜霉病敏感且具有其它优良经济和农艺性状的结球甘蓝为受体，通过原生质体不对称融合途径创制抗霜霉病结球甘蓝新种质，本发明将抱子甘蓝抗霜霉病基因转入结球甘蓝，建立了利用原生质体融合；技术进行快速抗病新种质的选育体系，建立了现代甘蓝种质资源创新及抗病育种高效技术平台。
原生质体不对称融合制备抗霜霉结球甘蓝种质方法

[发明专利]与结球甘蓝抗霜霉病基因相连锁的分子标记BoR_AAG/CTC112及其获得方法-CN200910152945.4无效
发明人：余小林;王神云;曹家树;李建斌 -专利权人：浙江大学;江苏省农业科学院蔬菜研究所
申请日： 2009-09-21 - 公布日： 2010-06-23 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种与结球甘蓝抗霜霉病基因相连锁的分子标记BoRAAG/CTC112及其获得方法。该分子标记为SEQ ID No.1的序列，长度共191bp。其获得方法如下：将结球甘蓝的抗病亲本‘R103’和感病亲本‘S101’杂交得到F1群体并构建相应的BC1、F2群体；明确该病害的病原是十字花科霜霉菌；进行抗病性调查发现在BC1、F2群体中对霜霉病的抗性受单基因显性控制；利用AFLP分子标记技术及改良BSA法进行与结球甘蓝霜霉病抗性相关的差异片段的筛选，得到AFLP差异片段BoRAAG/CTC并转化为SCAR标记BoRAAG/CTC112，设计的引物为FAAG/CTC112：5`-AT CCTACTGGTCCATACTCAC-3`和RAAG/CTC112：5`-TAGAAAATTTGGACATTCAT-3`；该SCAR标记BoRAAG/CTC112与抗性基因的遗传距离为5.7cM。该分子标记简单稳定，克服了常规育种方法周期长等缺点；可有目的的聚合多个抗霜霉病基因，培育出具稳定抗性的结球甘蓝品种。
甘蓝霜霉病基因相连分子标记 bor sub aag ctc112 及其获得方法

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