本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒抗体检测试纸条,所述试剂盒含有氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的重组PEDV S蛋白和抗SPA抗体。本发明通过优选PEDV S重组蛋白的片段,大幅度提高了构建的猪流行性腹泻病毒抗体的胶体金检测试剂盒检测的检测灵敏度,使得其检测的灵敏度达到ELISA检测试剂盒的水平。同时,本检测试剂盒特异性高,并具有良好的重复性,检测时间短,能同时检测大量的样品。本发明对解决大批量样品猪血清的猪流行性腹泻抗体检测具有重要的现实意义,通过对猪群抗体水平的检测,可以实时监控猪群的整体免疫效果,为该病的诊断、检测和监测等提供了有力的工具。
本发明涉及一种基于CRISPR/Cas9基因编辑技术的冠状病毒抗性克隆猪及其制备方法,该克隆猪的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)获取特异性靶向pAPN基因第2外显子和第3外显子的gRNA序列,其核苷酸序列依次如SEQ ID No.1‑2所示;制备获得对应gRNA序列的CRISPR‑Cas9打靶载体PX330‑pAPN2和PX330‑pAPN3;(2)将获得的打靶载体PX330‑pAPN2或打靶载体PX330‑pAPN3转入猪胎儿成纤维细胞中,获得pAPN基因编辑细胞系;(3)对pAPN基因编辑细胞系进行体细胞核移植操作,并将重构胚胎移植入代孕受体,通过自然妊娠出生所述克隆猪。本发明可获得猪冠状病毒受体pAPN完全缺失表达的克隆猪,具有抵抗猪冠状病毒感染的能力。