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[发明专利]草鱼干扰素、草鱼干扰素突变体及其应用和产品-CN202210466001.X有效
发明人：胡向东;邵健忠;项黎新;胡伟卿 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2022-04-26 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C07K14/555 文献下载
摘要：本发明提供了一种草鱼干扰素、草鱼干扰素突变体及其应用和产品，涉及生物技术领域。本发明提供的草鱼干扰素，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。经发明人研究发现，本发明提供的草鱼干扰素安全高效，对于草鱼出血病病毒(GCHV)和草鱼小RNA病毒(GCPV)具有较强的抗病毒活性，能够用于抗水产动物病毒产品的制备中。本发明提供的草鱼干扰素突变体安全高效，相较于草鱼干扰素，对于草鱼出血病病毒和草鱼小RNA病毒具有更强的抗病毒活性，能够用于抗水产动物病毒产品的制备中。
草鱼干扰素突变体及其应用产品

[发明专利]一种利用β-葡聚糖酶与几丁质酶提取红法夫酵母胞内虾青素的方法-CN202110719949.7有效
发明人：胡向东;梁新乐 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2021-06-28 - 公布日： 2022-11-25 - 主分类号： C07C403/24 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种利用β‑葡聚糖酶与几丁质酶提取红法夫酵母胞内虾青素的方法。本发明的提取方法包括如下步骤：(1)将红法夫酵母的菌体用碱液处理后，离心弃上清，得到中间菌体；(2)在中间菌体中加入β‑葡聚糖酶与几丁质酶的混合液进行酶解处理后，萃取得到虾青素。采用本发明的提取方法能最大限度的提取红法夫酵母胞内的虾青素，并且对环境无污染。
一种利用聚糖几丁质提取红法夫酵母胞内虾青素方法

[发明专利]一种提取法夫酵母中虾青素的方法-CN202110865933.7有效
发明人：胡向东;梁新乐 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2021-07-29 - 公布日： 2022-11-01 - 主分类号： C07C403/24 文献下载
摘要：本发明涉及虾青素提取方法的技术领域，本发明提供了一种提取法夫酵母中虾青素的方法。包括如下步骤：(1)用二甲基亚砜对法夫酵母进行浸泡预处理，然后分离法夫酵母；(2)在分离的法夫酵母中加入乙醇，用超声波进行破壁处理；(3)固液分离，得到法夫酵母细胞碎片；(4)在所述法夫酵母细胞碎片中加入丙酮浸提，得到虾青素浸提液。本发明提供了一种提取法夫酵母中虾青素的方法，本发明采用两步破壁法，即二甲基亚砜破壁法和超声波破壁法，先后处理法夫酵母，提高了虾青素的提取率，减少了虾青素的损失，使虾青素的产量能够达到180.7～197.6μg/g。
一种提取酵母中虾青素方法

[发明专利]一种水产用的天然免疫增强剂及用途-CN201810658546.4有效
发明人：胡向东;项黎新;叶茂 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2018-06-25 - 公布日： 2022-05-17 - 主分类号： C12N15/117 文献下载
摘要：本发明公开了一种水产用的天然免疫增强剂及用途，该天然免疫增强剂包括以下成分及其重量份：CpG寡核苷酸8‑10份、富含虾青素红法夫酵母粉5‑10份、果寡糖10‑20份、甘露寡糖10‑20份。该天然免疫增强剂应用于水产动物的饲料中，其添加量为饲料重量的0.05‑0.3%。有益效果为：本发明天然免疫增强剂中各成分起到相互增益的作用，提高水产动物的免疫力和抗应激能力，提高对病害的抵抗力，促进水产动物生长，成本低；该天然免疫增强剂应用于水产动物饲料中，提高水产动物全周期养殖的成活率，弥补了饲料中添加抗生素问题。
一种水产天然免疫增强用途

[发明专利]一种CpG复合佐剂及作为新型冠状病毒疫苗佐剂的用途-CN202010849816.7有效
发明人：胡向东;邵健忠;项黎新;胡伟卿 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2020-08-21 - 公布日： 2021-07-30 - 主分类号： A61K39/39 文献下载
摘要：本发明提供一种CpG复合佐剂及作为新型冠状病毒疫苗佐剂的用途，属于生物制品技术领域，该免疫佐剂包括聚乳酸类纳微球和免疫刺激剂，所述免疫刺激剂包括CPG ODN，所述CPG ODN偶联在聚乳酸类纳微球表面，所述CPG ODN偶联在聚乳酸类纳微球表面的方法包含：对聚乳酸类纳微球进行多巴胺修饰后悬浮于含有CpG ODN的PBS缓冲液中，所述PBS缓冲液中含有吡哆醇和甜菊糖A苷，室温混合，离心收集后进行洗涤。本发明提供的一种CpG复合佐剂作为新型冠状病毒疫苗佐剂能够有效增强抗原所诱导的细胞免疫及体液免疫应答，且制备成本较低、方便运输和储存。
一种 cpg 复合佐剂作为新型冠状病毒疫苗用途

[发明专利]一株高产细菌素乳酸菌的选育方法及其应用-CN201811591531.7有效
发明人：胡向东;叶茂;胡伟卿;周家琪 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2018-12-25 - 公布日： 2021-01-05 - 主分类号： C12N15/01 文献下载
摘要：本发明提供一株高产细菌素乳酸菌的选育方法，属于生物工程技术领域，该乳酸菌的选育是通过对乳酸菌进行诱变处理，然后进行筛选及抑菌物质测定，最终得到产细菌素的乳酸菌；上述诱变处理采用紫外‑微波复合诱变的方法；上述紫外诱变用菌株培养液中含有复硝酚钠和二甘醇。本发明提供的高产细菌素乳酸菌的选育方法能延长乳酸菌的生长期，提高合成细菌素效率，诱变致死率低，代谢产物多，所产细菌素能耐低温、高温环境，酸碱稳定性能强，具有广谱抑菌能力，生产成本低。本发明提供的高产细菌素乳酸菌可适用于规模化食品、医疗、饲料及发酵工业的保鲜防腐以及生物防治领域，用于减少或抑制细菌的定植或生长。
高产细菌乳酸菌选育方法及其应用

[发明专利]一种高产虾青素发酵培养基的配方技术及应用-CN201810658542.6有效
发明人：胡向东;叶茂;胡伟卿 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2018-06-25 - 公布日： 2020-11-06 - 主分类号： C12P23/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产虾青素发酵培养基的配方技术及应用，高产虾青素发酵培养基的配方为：葡萄糖、酵母膏、中药膏剂、五水合柠檬酸钠、磷酸氢二钾、无水硝酸按、七水合硫酸镁、二水合氯化钙、微量元素溶液、生物素溶液、氯仿、蒸馏水，将其应用于红法夫酵母发酵操作以制备虾青素。有益效果为：在红法夫酵母繁殖对数期添加6‑苄基腺嘌呤、吲哚乙酸、β‑萘氧乙酸，能有效提高红法夫酵母的细胞活性，改善糖酵解途径及磷酸戊糖途径，加速酵母细胞生长与繁殖，有助于提高代谢产物即菌体生物量，加快高密度发酵，提高产率，是一种高效、安全、简易的高产虾青素发酵培养基。
一种高产虾青素发酵培养基配方技术应用

[发明专利]一种转基因红法夫酵母高产3S;3`S虾青素方法及其应用-CN201811592517.9在审
发明人：胡向东;叶茂;胡伟卿;周家琪 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2018-12-25 - 公布日： 2019-04-09 - 主分类号： C12P23/00 文献下载
摘要：本发明提供一种转基因红法夫酵母高产3S,3`S虾青素的制备方法，属于生物工程技术领域，通过将含β‑胡萝卜素酮基酶和β‑胡萝卜素羟化酶表达载体的质粒整合到红法夫酵母菌突变株中，得到能生产3S,3'S虾青素的转基因酵母；然后提供上述转基因红法夫酵母，提供一种用于发酵培养上述酵母的培养基，并从发酵产物中提取3S,3'S虾青素。本发明提供的制备方法能保护外源酶表达活性，外源基因和载体使用量少，表达载体的连接效率、产量及产物稳定性高，所得酵母外源基因表达量高，抗抗生素能力高，使用寿命长，适用范围广；生产虾青素的方法能避免副产物积累，提高虾青素产量和得率，生产成本和能耗低，用于生产3S,3'S构型虾青素。
虾青素红法夫酵母转基因表达载体酵母制备胡萝卜素生物工程技术领域胡萝卜素羟化酶外源基因表达量酵母菌产物稳定性抗生素能力转基因酵母高产发酵产物发酵培养连接效率使用寿命外源基因质粒整合培养基副产物突变株外源酶得率红法酮基生产成本生产能耗积累应用

[发明专利]一种不含抗生素的微生物发酵饲料及其制备方法-CN201811589147.3在审
发明人：胡向东;叶茂;胡伟卿;周家琪 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2018-12-25 - 公布日： 2019-04-09 - 主分类号： A23K10/12 文献下载
摘要：本发明提供一种不含抗生素的微生物发酵饲料及其制备方法，属于生物饲料技术领域，其制备方法包含：将供发酵用的菌种分别扩增培养后混合得到复方乳酸菌发酵剂；将发酵原料和复方乳酸菌发酵剂、复合酶装入不透气的包装袋，排出空气，发酵；复方乳酸菌发酵剂的菌种包含植物乳酸菌、酿酒酵母菌、凝结芽孢杆菌、戊糖片球菌；复合酶包括淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶、葡萄糖氧化酶。本发明制备方法发酵效率高，能提高发酵饲料的香味，提高饲养动物的摄食率与促生长，同时能改进发酵饲料转化效率且使大大降低饲料喂养成本，制得的不含抗生素的微生物发酵饲料不含抗生素，具有提高动物的免疫力、肉料比，改善肉、蛋、奶等畜禽产品品质作用。
制备微生物发酵饲料乳酸菌发酵剂抗生素发酵饲料复合酶菌种发酵淀粉酶凝结芽孢杆菌葡萄糖氧化酶蛋白酶酿酒酵母菌戊糖片球菌植物乳酸菌发酵效率发酵原料扩增培养排出空气生物饲料饲料喂养饲养动物纤维素酶畜禽产品转化效率包装袋不透气促生长摄食率肉料免疫力装入改进

[发明专利]一种利用废弃笋壳固态发酵生产生物饲料及其制备方法-CN201811588473.2在审
发明人：胡向东;叶茂;胡伟卿;周家琪 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2018-12-25 - 公布日： 2019-04-09 - 主分类号： A23K10/30 文献下载
摘要：本发明提供一种利用废弃笋壳固态发酵生产生物饲料及其制备方法，属于农副产品废弃物深加工领域，该生物饲料的制备方法为：将复合微生物菌剂加入到固态发酵培养基中，笋壳、粉碎玉米芯和水搅拌均匀后加入到固态发酵培养基中，发酵温度为27‑40℃，发酵的相对湿度控制在50‑65%，发酵5‑8天得生物饲料；其中，固态发酵培养基中加入苯丙氨酸、苯丙酮酸、苯丙酮酸钠、苯丙酮酸铵或苯丙酮酸钙。本发明解决了现有笋壳直接作为饲料存在的适口性差、消化率和能源利用率低的问题；针对笋壳的营养特性，通过添加复合微生物菌剂，制备得到优质生物笋壳饲料，该饲料不仅营养价值高，易消化吸收，还具有抗菌、提高免疫力的功效。
笋壳生物饲料固态发酵培养基制备苯丙酮酸发酵复合微生物菌剂固态发酵生产废弃农副产品废弃物相对湿度控制苯丙酮酸钠粉碎玉米芯能源利用率饲料苯丙氨酸笋壳饲料消化吸收营养特性深加工适口性水搅拌消化率抗菌免疫力

[发明专利]一种免疫型大黄鱼生物发酵饲料及其用途-CN201811589146.9在审
发明人：胡向东;叶茂;胡伟卿;周家琪 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2018-12-25 - 公布日： 2019-04-09 - 主分类号： A23K50/80 文献下载
摘要：本发明提供一种免疫型大黄鱼生物发酵饲料及其用途，属于生物饲料技术领域，含有发酵处理过的鱼粉、豆粕、米糠、姜黄和废糖蜜的发酵料；发酵料中含有废糖蜜发生羰氨反应生成的醇酸类化合物和姜黄素。其包括以下步骤：将废糖蜜采用聚丙烯酰胺，并添加辅助澄清剂进行絮凝处理；取鱼粉、豆粕、米糠、姜黄和废糖蜜，混合均匀，超高压处理；将发酵原料中添加包含植物乳酸菌、酿酒酵母菌、凝结芽孢杆菌、戊糖片球菌的发酵剂，发酵，即得生物发酵饲料。本发明制备方法发酵饲料能提高大黄鱼的摄食率、免疫力、肉料比，改善鱼肉品质作用，且可减少水产动物氮磷的排泄，减轻对养殖水体的污染的免疫型大黄鱼生物发酵饲料，可用于大黄鱼的集约化养殖模式。
大黄鱼生物发酵饲料废糖蜜免疫型发酵料鱼粉豆粕姜黄米糠凝结芽孢杆菌超高压处理辅助澄清剂聚丙烯酰胺酿酒酵母菌戊糖片球菌植物乳酸菌排泄发酵处理发酵饲料发酵原料类化合物生物饲料水产动物絮凝处理养殖模式养殖水体鱼肉品质羰氨反应发酵剂集约化姜黄素摄食率醇酸氮磷可用肉料制备免疫力发酵污染

[发明专利]重组鱼类干扰素的工程菌及其产物的制备方法-CN201810658535.6在审
发明人：胡向东;项黎新;叶茂 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2018-06-25 - 公布日： 2018-12-14 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了重组鱼类干扰素的工程菌及其产物的制备方法，该工程菌的构建方法为：从草鱼中克隆出干扰素基因，将其克隆入表达质粒，得到重组表达质粒，再通过电转化法导入酿酒酵母，成功表达出草鱼干扰素重组蛋白。工程菌产物的制备方法：将工程菌活化后进行一级种、二级种摇瓶培养、酵罐培养，然后加入IPTG诱导培养，培养结束后收集菌体，用蒸馏水清洗后经细胞破碎、低温干燥、粉碎后制得的粉剂制品即为工程菌产物。有益效果为：本发明工程菌能成功、高效表达出鱼干扰素重组蛋白，工程菌产物‑重组鱼类干扰素的产量高，GcIFN基因易于诱导表达且表达稳定性，不需要进行纯化即可应用。
工程菌鱼类干扰素制备重组蛋白克隆重组表达质粒干扰素草鱼干扰素干扰素基因蒸馏水清洗表达质粒低温干燥电转化法粉剂制品高效表达酿酒酵母收集菌体细胞破碎摇瓶培养诱导表达二级种草鱼构建活化酵罐成功基因应用

[发明专利]重组微生物源天然虾青素基因工程菌及其产物的制备方法-CN201810658540.7在审
发明人：胡向东;叶茂;胡伟卿 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2018-06-25 - 公布日： 2018-12-14 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了重组微生物源天然虾青素基因工程菌及其产物的制备方法，该工程菌的制备方法包括基因扩增、制备克隆质粒、制备重组表达质粒、制备重组微生物源天然虾青素基因工程菌。工程菌产物的制备方法为：将活化后工程菌进行一级种、二级种摇瓶培养、酵罐培养，培养结束后收集菌体，避光下加入STET缓冲液和溶菌酶，搅拌均匀后置于水浴中，细胞裂解液裂解，离心上清加入异丙醇沉降，用无菌水溶解离心沉淀，冷冻干燥，即得重组虾青素。有益效果为：本发明该工程菌生长繁殖迅速、能成功表达出重组虾青素蛋白，表达量高、产量高，得到的重组虾青素为3S,3'S构型，工程菌发酵制备重组虾青素的产量高、效率高，大大节省人力物力成本。
制备工程菌虾青素基因工程菌天然虾青素重组微生物重组表达质粒细胞裂解液基因扩增克隆质粒离心沉淀人力物力收集菌体摇瓶培养沉降表达量二级种缓冲液溶菌酶无菌水异丙醇避光活化酵罐裂解水浴发酵溶解蛋白繁殖生长成功

[发明专利]重组鱼类白细胞介素-2的工程菌及其产物的制备方法-CN201810658538.X在审
发明人：胡向东;项黎新;叶茂 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2018-09-13 - 公布日： 2018-12-07 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了重组鱼类白细胞介素‑2的工程菌及其产物的制备方法，该工程菌的制备方法为：将鱼淋巴细胞的分离，丝裂原诱导，提取总mRNAs，再将总mRNAs逆转录成cDNA模版，PCR扩增得白细胞介素‑2基因片段；将IL2序列和pYES2质粒双酶切，回收相应的酶切片段后连接IL2基因和载体，连接液转化宿主菌，筛选，获得重组的IL2‑pYES2质粒；将质粒电转化导入酵母菌株中，获得酵母工程菌。有益效果为：本发明工程菌能成功、高效表达出鱼干扰素重组蛋白，工程菌产物‑重组鱼类白细胞介素‑2的产量高，重组白细胞介素‑2基因易于诱导表达且表达稳定性，不需要进行纯化即可应用。
白细胞介素工程菌质粒制备鱼类总mRNAs 淋巴细胞干扰素酵母工程菌高效表达基因片段酵母菌株酶切片段诱导表达重组蛋白转化宿主电转化连接液逆转录双酶切丝裂原基因模版诱导筛选回收应用成功

[发明专利]一种高产CpG ISS工程菌构建方法与用途-CN201810658543.0在审
发明人：胡向东;项黎新;叶茂 -专利权人： 浙江皇冠科技有限公司
申请日： 2018-06-25 - 公布日： 2018-12-07 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种高产CpG ISS工程菌构建方法与应用，其构建方法为：以10条对水产养殖鱼虾类有较佳免疫活性的CpG‑ISS为基础，将10条CpG‑ISS相互串联并人工合成，利用同尾酶切技术将串联序列五次重复克隆于pYES2载体中，构建成多拷贝CpG基序的质粒载体pYES2‑90CpG，并以电转化方式导入酿酒酵母菌株中，获得酵母工程菌，筛选出高产CpG ISS工程菌，即可。有益效果为：本发明工程菌的构建方法简单可行，构建的工程菌生长繁殖迅速、安全可靠、CpG ISS的产量和生产效率高，能保持CpG‑ISS产品的活性和稳定性，制得的工程菌产物应用于水产动物病害防控方面。
工程菌构建工程菌构建高产酿酒酵母菌株水产动物病害酵母工程菌产物应用串联序列免疫活性生产效率质粒载体电转化多拷贝同尾酶水产养殖串联鱼虾繁殖克隆筛选生长重复应用

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