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[发明专利]一种高间苯三酚合成能力的基因工程菌及构建方法和应用-CN201710269602.0有效
发明人： 张汝兵;咸漠;曹玉锦;孙超 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2017-04-24 - 公布日： 2020-03-06 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高间苯三酚合成能力的基因工程菌及构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明所提供的构建方法1)制备含有分子伴侣蛋白groESL基因的重组质粒；2)制备含有聚酮合成酶基因phlD、多重抗性激活因子marA、乙酰CoA羧化酶基因ACCase的重组质粒；3)将步骤1)和步骤2)所得重组质粒导入到感受态细胞中，获得重组菌株。利用本发明提供的方法制备的基因工程菌，合成间苯三酚的能力得到明显提高。
一种高间苯三酚合成能力基因工程构建方法应用

[发明专利]一种产R-(+)-紫苏醇的基因工程菌及其构建方法与应用-CN201910993852.8在审
发明人：孙超;张汝兵;咸漠;董先娟 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2019-10-18 - 公布日： 2020-01-10 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种产R‑(+)‑紫苏醇的基因工程菌及其构建方法与应用，涉及基因工程及发酵工程领域，本发明提供工程菌是过表达HMG‑CoA合成酶基因mvaS、乙酰CoA乙酰基转移酶mvaE、牦牛儿基焦磷酸合成酶基因GPPS、D‑柠檬烯合成酶基因ClLS、对异丙基甲苯单氧合酶羟化酶基因cymAa、对异丙基甲苯单氧酶还原酶基因cymAb、MVA激酶ERG12基因、MVAP激酶ERG8基因、甲羟戊酸脱羧酶ERG19基因和异戊焦磷酸异构酶IDI基因。同时，本发明提供了产R‑(+)‑紫苏醇的应用方法，在5L罐发酵，能够异源合成R‑(+)‑紫苏醇45.3mg/L，本发明可用于R‑(+)‑紫苏醇的工业化合成。
基因紫苏醇合成酶对异丙基甲苯激酶焦磷酸合成酶乙酰基转移酶工业化合成还原酶基因基因工程菌羟化酶基因单氧合酶发酵工程基因工程甲羟戊酸异源合成牦牛儿基单氧酶工程菌罐发酵焦磷酸柠檬烯脱羧酶异构酶构建可用乙酰应用

[发明专利]一种合成D-柠檬烯的基因工程菌及其构建方法与应用-CN201910997620.X在审
发明人：孙超;张汝兵;咸漠;董先娟 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2019-10-18 - 公布日： 2020-01-10 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种合成D‑柠檬烯的基因工程菌及其构建方法与应用，涉及基因工程及发酵工程领域，本发明在所述基因工程菌中过表达HMG‑CoA合成酶基因mvaS、乙酰CoA乙酰基转移酶mvaE、牦牛儿基焦磷酸合成酶GPPS基因、D‑柠檬烯合成酶基因ClLS、MVA激酶ERG12基因、MVAP激酶ERG8基因、甲羟戊酸脱羧酶ERG19基因、异戊焦磷酸异构酶IDI基因。在LB培养基中摇瓶发酵后，能够异源合成D‑柠檬烯，D‑柠檬烯的产量27.3mg/L发酵液。本发明可用于D‑柠檬烯工业化生产。
柠檬烯基因合成酶基因工程菌激酶焦磷酸合成酶乙酰基转移酶发酵工程基因工程甲羟戊酸摇瓶发酵异源合成牦牛儿基发酵液焦磷酸脱羧酶异构酶构建可用乙酰合成应用

[发明专利]一种可提高间苯三酚生物合成产量并降低生产成本的基因工程菌及其构建方法与应用-CN201910250966.3在审
发明人：咸漠;刘炜;袁珊;张汝兵;曹玉锦 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2019-03-29 - 公布日： 2019-06-28 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种可提高间苯三酚生物合成产量并降低生产成本的基因工程菌及其构建方法与应用，涉及基因工程及发酵工程领域，所述基因工程菌表达包含聚酮合成酶基因phlD1和rop基因的重组质粒。本发明提供的基因工程菌用于发酵生产间苯三酚，不仅PG产量提高、生产成本降低，还降低了原有pNEW表达载体的漏表达水平。此结果为PG生物合成提供技术支持，也为生物合成其他化学品在选择诱导表达系统时提供参考。
基因工程菌生物合成间苯三酚构建聚酮合成酶基因诱导表达系统表达水平表达载体发酵工程基因工程技术支持重组质粒化学品生产成本发酵应用参考生产

[发明专利]一种用于大规模连续发酵的发酵与分离耦合系统-CN201710181573.2有效
发明人：咸漠;孙超;张汝兵;曹玉锦;刘辉 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2017-03-24 - 公布日： 2019-03-15 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于大规模连续发酵的发酵与分离耦合系统，属于发酵与分离工程技术领域。该发酵与分离耦合系统包括发酵罐，分离装置，供料泵，氨水罐，补料罐，流加罐，吸附装置，活化罐，初培罐，导纳装置，安全过滤器，气水分离器，物料循环泵以及连接管道。其中，导纳装置连接在通过管道与过滤装置的上部连通。气水分离器设有液位计和与液位计连锁控制的阀VIII。过滤装置内设有与物料循环泵的控制器联锁的流速计和粘度计。本发明采用气水分离装置和导纳装置，大幅降低在输送过滤中管道内部的气体含量，既增加发酵液在输送过滤过程中的运行稳定性，又大幅减低输送过程中气蚀作用对设备的损坏，延长设备使用周期，降低维护和生产成本。
一种用于大规模连续发酵发酵分离耦合系统

[发明专利]一种高产2;4-二乙酰基间苯三酚的重组菌及其构建方法与应用-CN201811354253.3在审
发明人： 张汝兵;咸漠;孙超;刘炜;曹玉锦 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2018-11-14 - 公布日： 2019-03-12 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种高产2,4‑二乙酰基间苯三酚的重组菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明通过在2,4‑二乙酰基间苯三酚生产的工程菌株中整合编码多重抗性因子的基因marA和乙酰辅酶A羧化酶基因ACC，提高了2,4‑二乙酰基间苯三酚的产量。本发明可用于工业化生产2,4‑二乙酰基间苯三酚。
间苯三酚乙酰基重组菌构建乙酰辅酶A羧化酶基因基因工程技术高产工程菌株抗性因子可用整合应用基因生产

[发明专利]一种体外酶反应合成间苯三酚的方法及应用-CN201510458357.9有效
发明人：咸漠;张汝兵 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2015-07-30 - 公布日： 2018-08-17 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种体外酶反应合成间苯三酚的方法及应用，属于生物工程技术领域。本发明所提供的方法是分别构建含有乙酰辅酶A合成酶ACS基因，乙酰辅酶A羧化酶亚基基因accA，乙酰辅酶A羧化酶亚基基因accB，乙酰辅酶A羧化酶亚基基因accC，乙酰辅酶A羧化酶亚基基因accD及聚酮合成酶基因phlD的重组载体，将重组载体分别转化到宿主菌中后过表达，利用超声波破碎菌体，分离纯化后获得酶液，按比例混合酶液和反应底物后通过体外酶反应合成间苯三酚。本发明实现了通过体外酶反应合成间苯三酚，并可以精确调控各酶及辅助因子的用量。
一种体外反应合成间苯三酚方法应用

[发明专利]一种三硝基间苯三酚的绿色合成方法及应用-CN201510283429.0有效
发明人：咸漠;孙伟之;张汝兵;曹玉锦 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2015-05-29 - 公布日： 2015-09-23 - 主分类号： C07C205/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种三硝基间苯三酚的绿色合成方法及应用，属于有机合成技术领域。本发明所提供的方法为将亚硝酸酯滴加至间苯三酚醇溶液中进行亚硝化反应，然后蒸除醇溶剂，加入氢氧化钠溶液溶解，再滴加过氧化氢溶液进行氧化反应，调节pH后利用有机溶剂萃取，洗涤浓缩后获得三硝基间苯三酚。本发明污染小、腐蚀性小，反应条件温和，无需催化剂，克服了传统合成方法中污染严重、腐蚀设备、条件剧烈等缺点。适用于合成三硝基间苯三酚。
一种硝基间苯三酚绿色合成方法应用

[发明专利]一种提高间苯三酚产量的基因改造方法及应用-CN201410722779.8在审
发明人：咸漠;赵广;刘敏;张汝兵 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2014-12-02 - 公布日： 2015-03-04 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高间苯三酚产量的基因改造方法及应用，属于基因工程技术领域。本发明所提供的方法是通过敲除或插入出发菌株全局调控因子arcA基因的方式获得突变菌株，再将突变菌株转为感受态后导入含有聚酮合成酶基因phlD、多重抗性激活因子marA、乙酰CoA羧化酶基因ACCase的重组质粒，获得重组细胞。本发明还提供了利用所得重组细胞生产间苯三酚的方法。本发明首次实现在转录水平通过全局性调控碳代谢的方式，发酵后间苯三酚的产量提高了2.06倍，具有较高的工业应用价值。
一种提高间苯三酚产量基因改造方法应用

[发明专利]一种以乙酸为原料合成间苯三酚的基因工程菌及其构建方法与应用-CN201410636627.6在审
发明人：咸漠;徐鑫;曹玉锦;张汝兵 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2014-11-12 - 公布日： 2015-02-25 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种以乙酸为原料合成间苯三酚的基因工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明所提供的基因工程菌是共表达乙酰辅酶A合成酶基因acs、苹果酸酶基因maeB、聚烯酮酐合成酶基因phlD和多重抗性因子基因marA的基因工程菌。同时本发明还提供了基因工程菌的构建方法。本发明所提供的基因工程菌能够以乙酸为原料合成间苯三酚，具有生产成本低，产量高的特点，产量可达1.2g/L以上，最高产率可达30％，为理论产率的52％，适用于产业化推广。
一种乙酸原料合成间苯三酚基因工程及其构建方法应用

[发明专利]一种以甘油三酯为碳源的大肠杆菌及其在生物基化学品合成中的应用-CN201310474480.0有效
发明人：咸漠;曹玉锦;张汝兵;曹志峰 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2013-10-12 - 公布日： 2014-02-12 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种以甘油三酯为碳源的大肠杆菌及其在生物基化学品合成中的应用，将来自真养产碱杆菌（Alcaligenes eutrophus）的分泌型脂酶（slipase）基因构建到原核表达载体pUC19上，然后导入敲除了fadR基因的大肠杆菌得到的重组菌，利用该菌株以甘油三酯为底物进行发酵，结果表明，在甘油三酯作为唯一碳源的培养基中，该菌株能够正常生长。本发明为脂类化合物的生物利用开辟了一条新的途径。
一种甘油碳源大肠杆菌及其生物化学品合成中的应用

[发明专利]一种联产3-HP和P3HP的重组肺炎克雷伯氏菌及其制备方法和应用-CN201310409148.6有效
发明人：咸漠;冯新军;赵广;张汝兵 -专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
申请日： 2013-09-10 - 公布日： 2014-01-08 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种联产3-HP和P3HP的重组肺炎克雷伯氏菌及其制备方法和应用。是将甘油脱水酶基因，甘油脱水酶再激活酶基因，醛脱氢酶基因，丙酰辅酶A合成酶基因和聚羟基脂肪酸合成酶基因导入敲除了1,3-丙二醇氧化还原酶基因和醛还原酶/醇脱氢酶基因的宿主重组肺炎克雷伯氏菌，得到重组菌。本发明降低了3-羟基丙酸和聚3-羟基丙酸的生产成本，实现了以同一菌体为宿主同时合成3-羟基丙酸和聚3-羟基丙酸。
一种联产 hp p3hp 重组肺炎克雷伯氏菌及其制备方法应用

[实用新型]一种输液管的夹紧输送装置-CN201220700931.9有效
发明人：胡友民;张如杰;吴波;段晓坤;张汝兵;刘奥;何纯;李延磊 -专利权人：华中科技大学
申请日： 2012-12-17 - 公布日： 2013-06-05 - 主分类号： B65H51/18 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种用于输液管的夹紧输送装置，包括：第一方向运动机构，设置在固定与工作台上的下层支撑板上，可沿第一方向移动；第二方向运动机构，固定设置在第一方向运动机构上，可相对该第一方向运动机构沿第二方向移动；中部夹紧气爪，设置在第一方向运动机构上，用于夹持输液管中部；尾部夹紧气爪，其设置在第二方向运动机构上，用于夹持输液管尾部；通过该第一方向运动机构带动中部夹紧气爪在第一方向上的运动配合第二方向运动机构带动尾部夹紧气爪在第二方向上的运动，实现将输液管夹持送入缠绕装置的缠绕头上进行缠绕。本装置可以实现输液管的自动夹紧以及缠绕过程中的自动输送，用自动化取代手工方式，大大提高生产效率效益。
一种输液夹紧输送装置

[发明专利]一种输液管的夹紧输送装置-CN201210550461.7有效
发明人：胡友民;张如杰;吴波;段晓坤;张汝兵;刘奥;何纯;李延磊 -专利权人：华中科技大学
申请日： 2012-12-17 - 公布日： 2013-04-24 - 主分类号： B65H51/18 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于输液管的夹紧输送装置，包括：第一方向运动机构，设置在固定与工作台上的下层支撑板上，可沿第一方向移动；第二方向运动机构，固定设置在第一方向运动机构上，可相对该第一方向运动机构沿第二方向移动；中部夹紧气爪，设置在第一方向运动机构上，用于夹持输液管中部；尾部夹紧气爪，其设置在第二方向运动机构上，用于夹持输液管尾部；通过该第一方向运动机构带动中部夹紧气爪在第一方向上的运动配合第二方向运动机构带动尾部夹紧气爪在第二方向上的运动，实现将输液管夹持送入缠绕装置的缠绕头上进行缠绕。本装置可以实现输液管的自动夹紧以及缠绕过程中的自动输送，用自动化取代手工方式，大大提高生产效率效益。
一种输液夹紧输送装置

[实用新型]一种新型瘪胎应急器-CN201220190354.3有效
发明人： 张汝兵 -专利权人： 张汝兵
申请日： 2012-04-25 - 公布日： 2012-11-28 - 主分类号： B60S13/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种新型瘪胎应急器，其特征在于：所述的应急器由至少一个承载单元组成；所述的承载单元由承载板以及安装于横向贯穿承载板的轴上的滚轮组成；并且，在所述承载板上设置有用于架制瘪胎的凹槽；在所述承载单元的承载板纵向一端设置了凸缘，另一端设置了U型槽；并且，所述的U型槽的槽宽不小于凸缘的宽度；在所述承载板的凸缘与U型槽上设置了通孔；所述的应急器是通过承载单元的凸缘与该承载单元的前一个承载单元的U型槽，以及该承载单元的U型槽与后一个承载单元的凸缘首尾相连而组成的；所述的承载单元之间是通过设置在通孔内的销钉实现动态连接的；在所述的位于末端的承载单元的凸缘上设置了具有调节瘪胎应急器工作长度的调节孔。
一种新型应急