本发明涉及一种检测CALR基因突变的内参扩增引物组合物,其包括SEQ ID NO:1‑SEQ ID NO:6所示序列的引物;本发明还涉及一种含有上述内参扩增引物组合物的内参扩增体系及其试剂盒和检测方法,以及由上述内参扩增引物组合物扩增的CALR基因突变的靶序列,该靶序列为SEQ ID NO:7所示序列。本发明所述的内参扩增体系及其检测方法与CALR基因的突变体系配套使用,其既可以对突变型的CALR基因进行快速检测,也可以对野生型的CALR基因进行扩增,作为CALR突变检测试剂盒的内参质控体系,在质量控制的提升方面具有重要意义。
本发明涉及一种用于检测CALR基因2型突变的引物组合物,其包括含有SEQ ID NO:2‑SEQ ID NO:7所示序列的引物;本发明还涉及一种含有上述引物组合物的试剂盒及其检测方法,以及上述引物组合物扩增的CALR基因2型突变的靶序列,该靶序列为SEQ ID NO:1所示序列。本发明所述的试剂盒及其检测方法具有良好的特异性和稳定性,梯度突变负荷浓度的样本用所建立的LAMP反应体系进行扩增,发现突变负荷检出敏感性可达到3%,几乎与探针法实时PCR的效果相当,且其可对CALR基因2型突变进行可视化检测,与传统的检测方法相比,该方法对设备和环境要求低,检测速度更快,检测灵敏度更高。
本发明涉及一种检测CALR基因1型突变的引物组合物,其包括含有SEQ ID NO:2‑SEQ ID NO:7所示序列的引物和SEQ ID NO:8所示序列的PNA探针;本发明还涉及一种含有上述引物组合物的试剂盒及其检测方法,以及上述引物组合物扩增的CALR基因1型突变的靶序列,该靶序列为SEQ ID NO:1所示序列。本发明所述的试剂盒及其检测方法具有良好的特异性和稳定性,梯度突变负荷浓度的样本用所建立的LAMP反应体系进行扩增,发现突变负荷检出敏感性可达到1%,与探针法实时PCR的效果相当,且其可对CALR基因1型突变进行可视化检测,与传统的检测方法相比,该方法对设备和环境要求低,检测速度更快,检测灵敏度更高。
本发明涉及一种检测JAK2 V617F基因突变的引物组合物,其含有SEQ ID NO2‑SEQ ID NO6所示序列的引物和SEQ ID NO7所示序列的PNA探针;本发明还涉及一种含有上述引物组合物的试剂盒及其检测方法。本发明所述的试剂盒及其检测方法具有良好的特异性和稳定性,梯度突变负荷浓度的样本用所建立的LAMP反应体系进行扩增,发现突变负荷检出敏感性可达到1%,与探针法实时PCR的效果相当,且其可对JAK2 V617F基因突变进行可视化检测,与传统的检测方法相比,该方法对设备和环境要求低,检测速度更快,检测灵敏度更高,有助于将来POCT(床旁检测)的实现。
本发明属于基因工程和基因诊断领域,涉及肿瘤抑癌基因Deleted in Livercancer-1,肝癌缺失因子1,甲基化的检测及用途。本发明提供了一种定量检测肝癌缺失因子1启动子甲基化水平的方法:对样本DNA作甲基化修饰,再采用聚合酶链式反应扩增出肝癌缺失因子1启动子的DNA片段;加入饱和荧光染料,检测聚合酶链式反应产物的荧光变化,进行熔解曲线分析;根据样品曲线在标准曲线中的位置,确定样品中肝癌缺失因子1启动子甲基化水平。该方法具有方便、快速、不需要电泳、无污染,非常灵敏的特点,可用于各种类型的标本。可检测到低至肝癌缺失因子1启动子1%的甲基化水平。