本发明公开了属于生物化学与分子生物学技术领域的一种密码子优化的β‑半乳糖苷酶基因及其应用。该β‑半乳糖苷酶的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。本发明根据牛乳汁中相关高表达蛋白密码子的偏爱性,对细菌来源的β‑半乳糖苷酶基因的密码子进行优化。优化后的OLacZ基因在小鼠乳腺上皮细胞中进行验证,证明其相对于野生型的LacZ基因表达量有着显著提高,约3.7倍。经密码子优化的OLacZ基因在泌乳期母鼠的乳腺组织中,更能有效表达。β‑半乳糖苷酶作为一种报告基因,在牛乳腺组织中的高效表达,为进一步研制乳腺生物反应器,提供一种有效的工具基因。
本发明公开了一种利用转基因动物的乳腺生产人转铁蛋白的方法及其表达载体。本发明的方法包括利用含有人转铁蛋白基因表达盒的载体将人转铁蛋白基因表达盒转入哺乳动物基因组中获得转基因动物,从转基因动物乳汁中获得人转铁蛋白,其中,该表达盒从5’到3’依次包括启动子、人转铁蛋白基因和牛生长激素基因终止子,所述启动子是山羊β‑酪蛋白基因,其序列如SEQ ID NO.1所示,所述人转铁蛋白基因是序列表中SEQ ID NO.2所示,所述的载体是真核表达载体pcDNA3.1,所述的哺乳动物不包括人。本发明的方法,在动物的乳汁中人转铁蛋白的浓度至少可达到5g/L,比现有的方法提高了160倍以上,具有巨大的商业利用价值。
本发明公开了属于生物技术领域的一种利用vWF稳定表达人凝血因子VIII的乳腺特异共表达载体。它包括骨架质粒和hFVIIIBDD-IRES-vWF片段,其中所述骨架质粒为pcDNA3.1(-)质粒,hFVIIIBDD-IRES-vWF片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。本发明还公开了共表达载体的制备方法,包括以下步骤:(1)利用包含hFVIIIBDD-IRES-vWF片段的共表达质粒,通过显微注射法制备转基因哺乳动物,(2)从步骤(1)所得转基因哺乳动物的乳汁中分离人凝血因子VIII即得。在本发明制备的转基因动物乳汁中所表达的vWF蛋白能够显著延长凝血因子VIII的半衰期。