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[发明专利]利用家蚕后部丝腺体外表达系统合成蛋白质的方法-CN200810120477.8无效
发明人：张耀洲;夏佳音;陈健;吕正兵;陈琴;聂作明;盛清 -专利权人：浙江理工大学
申请日： 2008-08-29 - 公布日： 2009-02-04 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用家蚕后部丝腺体外表达系统合成蛋白质的方法，在家蚕后部丝腺组织提取液中加入pUC19－FL－GFP－PolyA重组质粒或插有外源基因的pUC19－FL－GFP－PolyA重组质粒或pUC19－FL－PolyA质粒或插有外源基因的pUC19－FL－PolyA质粒及蛋白酶抑制剂，25℃～29℃水浴，即得目的蛋白的表达。本发明的有益之处在于：本发明是在25℃～29℃条件下表达蛋白，低温(常规是在37℃)条件有利于表达蛋白以溶解状态生成，减少包含体的形成，利于蛋白的分离纯化。同时，本发明所述的方法不受细胞的限制，可在短时间内合成蛋白质。
利用家蚕后部腺体外表系统合成蛋白质方法

[发明专利]利用多基因重组表达多蛋白复合物-CN200680050687.3无效
发明人： T·里克蒙德;I·伯格 -专利权人： ETH苏黎世公司
申请日： 2006-11-06 - 公布日： 2009-01-28 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及编码用来编码至少3种多肽的多基因的多核苷酸，其中至少一种构成多基因的基因是非病毒来源的，至少2种由构成多基因的基因所编码的多肽都能够至少瞬时与由所述多基因的基因所编码的至少另一种多肽进行相互作用，并且构成多基因的基因相互之间通过编码至少一种蛋白酶裂解位点的序列来连接。本发明也涉及由多基因编码的多蛋白。本发明进一步的实施方案为含有重组多肽的载体，含重组多肽和/或载体的宿主细胞以及用重组多肽和/或载体转化的除人外的转基因动物。本发明也涉及多核苷酸的制备方法以及多蛋白复合物的制备方法。本发明的实施方案尤其可用于基因治疗、候选药物的筛选、疫苗制备以及为结构解析所进行的多蛋白复合物结晶。
利用多基因重组表达蛋白复合物

[发明专利]一种可诱生细胞免疫应答的真核表达载体及其疫苗-CN200810005071.5无效
发明人：张兴黔;钱关祥;方丽娟;钱丽;梅文瀚 -专利权人：上海交通大学医学院
申请日： 2006-08-18 - 公布日： 2008-11-26 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及真核表达载体，具体地说关于一种可诱生细胞免疫应答的真核表达载体及其疫苗，本发明技术方案如下：一种可诱生细胞免疫应答的真核表达载体pcDNA 3.1/β2M－IL15，它的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所述，一种可诱生细胞免疫应答的真核表达载体pcDNA3.1/β2M－IL15，它的构建如下：(1)克隆人β2微球蛋白基因启动子；(2)克隆人白细胞介素15基因片断；(3)构建pcDNA3.1/β2M－IL15真核表达载体。本发明优点表现在：有利于克服常规表位DNA疫苗免疫原性低的缺陷，可用于肿瘤及病毒持续性感染等的预防和治疗。
一种可诱生细胞免疫应答表达载体及其疫苗

[发明专利]重组人HNP基因脂质体复合物、制备方法及用途-CN200810301844.4有效
发明人：魏于全;王永生;杨莉 -专利权人：四川大学
申请日： 2008-05-30 - 公布日： 2008-10-08 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及重组人HNP基因脂质体复合物、制备方法及用途，属于基因治疗领域，所解决的技术问题是提供了一种新的肿瘤基因治疗的药物。该真核表达载体含有并能表达人α－防御素成熟肽编码基因，还能制备成脂质体复合物。本发明真核表达载体及其脂质体复合物能在肿瘤内部表达并分泌具有杀伤活性的人α－防御素成熟肽，产生了明显的抗肿瘤作用，避开了人α－防御素成熟肽活性易受血清蛋白及Ca离子浓度影响的缺点，为肿瘤的基因治疗提供了新的选择。
重组 hnp 基因脂质体复合物制备方法用途

[发明专利]一种抑制小鼠B7－DC基因表达的shRNA真核表达载体的构建方法-CN200810036673.7无效
发明人：江文正;樊燕;闻洁君;郝文丽 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2008-04-25 - 公布日： 2008-09-17 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了一种抑制小鼠B7－DC基因表达的shRNA真核表达载体的构建方法，其构建流程是：根据Genebank提供的小鼠B7－DC的基因序列，选取编码区第361～379位核苷酸序列为靶序列设计并合成引物，通过引物退火，连接至干扰载体pAS，即得本发明构建的真核表达载体shRNA－B7－DC。本发明所构建的真核表达载体，不仅能特异性靶向并抑制小鼠骨髓来源的树突状细胞中B7－DC基因的表达，还可以大量扩增，并可将其有效片段克隆至其它更好的载体上，具有操作简单、应用方便、毒副作用小、成本低等优点，可以为研究B7－DC基因的功能、增强树突状细胞诱导的免疫应答中的应用研究提供一个有效工具。
一种抑制小鼠 b7 dc 基因表达 shrna 载体构建方法

[发明专利]一种禽传染性支气管炎病毒N基因与禽IL－2基因共表达DNA疫苗pIRES－N/IL2-CN200810044941.X无效
发明人：王红宁;阳泰;张毅;李玉玲;唐梦君;夏青青;曾瑜虹 -专利权人：四川大学
申请日： 2008-03-11 - 公布日： 2008-09-03 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及动物医药生物工程研究领域，是一种禽传染性支气管炎病毒N基因与禽IL－2基因共表达DNA疫苗pIRES－N/IL2。本发明将pIBVN、pIRES－EGFP/DsRed质粒用NheI和XhoI双酶切后，胶回收N基因和载体片段进行连接，构建真核表达质粒pIRES－N/DsRed。以pDNAIL－2质粒为模板，PCR获取禽源IL－2基因。将IL－2、pIRES－N/DsRed质粒用BamHI和NotI双酶切后，胶回收IL－2基因和载体片段进行连接，构建了一种禽传染性支气管炎病毒中国分离株SAIBk株N基因与禽IL－2基因共表达DNA疫苗pIRES－N/IL2。该疫苗可用于预防禽传染性支气管炎。
种禽传染性支气管炎病毒基因 il 表达 dna 疫苗 pires il2

[发明专利]一种禽传染性支气管炎病毒S1基因与禽IL－18基因共表达DNA疫苗pIRES－S1/IL18-CN200810044946.2无效
发明人：王红宁;阳泰;张毅;李玉玲;唐梦君;夏青青;曾瑜虹 -专利权人：四川大学
申请日： 2008-03-11 - 公布日： 2008-08-13 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及动物医药生物工程研究领域，是一种禽传染性支气管炎病毒S1基因与禽IL－18基因共表达DNA疫苗pIRES－S1/IL18。本发明将pIBVS1、pIRES－EGFP/DsRed质粒用SacI和XhoI双酶切后，胶回收S1基因和载体片段进行连接，构建真核表达质粒pIRES－S1/DsRed。以pDNAIL－18质粒为模板，PCR获取禽源IL－18基因。将IL－18、pIRES－S1/DsRed质粒用BamHI和NotI双酶切后，胶回收IL－18基因和载体片段进行连接，构建了一种禽传染性支气管炎病毒中国分离株SAIBk株S1基因与禽IL－18基因共表达DNA疫苗pIRES－S1/IL18。该疫苗可用于预防禽传染性支气管炎。
种禽传染性支气管炎病毒 s1 基因 il 18 表达 dna 疫苗 pires il18

[发明专利]一种禽传染性支气管炎病毒M基因与禽IL－18基因共表达DNA疫苗pIRES－M/IL18-CN200810044942.4无效
发明人：王红宁;阳泰;张毅;李玉玲;唐梦君;夏青青;曾瑜虹 -专利权人：四川大学
申请日： 2008-03-11 - 公布日： 2008-08-13 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及动物医药生物工程研究领域，是一种禽传染性支气管炎病毒M基因与禽IL－18基因共表达DNA疫苗pIRES－M/IL18。本发明将pIBVM、pIRES－EGFP/DsRed质粒用NheI和XhoI双酶切后，胶回收M基因和载体片段进行连接，构建真核表达质粒pIRES－M/DsRed。以pDNAIL－18质粒为模板，PCR获取禽源IL－18基因。将IL－18、pIRES－M/DsRed质粒用BamHI和NotI双酶切后，胶回收IL－18基因和载体片段进行连接，构建了一种禽传染性支气管炎病毒中国分离株SAIBk株M基因与禽IL－18基因共表达DNA疫苗pIRES－M/IL18。该疫苗可用于预防禽传染性支气管炎。
种禽传染性支气管炎病毒基因 il 18 表达 dna 疫苗 pires il18

[发明专利]一种禽传染性支气管炎病毒S1基因与禽IL－2基因共表达DNA疫苗pIRES－S1/IL2-CN200810044947.7无效
发明人：王红宁;阳泰;张毅;李玉玲;唐梦君;夏青青;曾瑜虹 -专利权人：四川大学
申请日： 2008-03-11 - 公布日： 2008-08-13 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及动物医药生物工程研究领域，是一种禽传染性支气管炎病毒S1基因与禽IL－2基因共表达DNA疫苗pIRES－S1/IL2。本发明将pIBVS1、pIRES－EGFP/DsRed质粒用SacI和XhoI双酶切后，胶回收S1基因和载体片段进行连接，构建真核表达质粒pIRES－S1/DsRed。以pDNAIL－2质粒为模板，PCR获取禽源IL－2基因。将IL－2、pIRES－S1/DsRed质粒用BamHI和NotI双酶切后，胶回收IL－2基因和载体片段进行连接，构建了一种禽传染性支气管炎病毒中国分离株SAIBk株S1基因与禽IL－2基因共表达DNA疫苗pIRES－S1/IL2。该疫苗可用于预防禽传染性支气管炎。
种禽传染性支气管炎病毒 s1 基因 il 表达 dna 疫苗 pires il2

[发明专利]一种禽传染性支气管炎病毒N基因与禽IL－18基因共表达DNA疫苗pIRES－N/IL18-CN200810044944.3无效
发明人：王红宁;阳泰;张毅;李玉玲;唐梦君;夏青青;曾瑜虹 -专利权人：四川大学
申请日： 2008-03-11 - 公布日： 2008-08-06 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及动物医药生物工程研究领域，是一种禽传染性支气管炎病毒N基因与禽IL－18基因共表达DNA疫苗pIRES－N/IL18。本发明将pIBVN、pIRES－EGFP/DsRed质粒用NheI和XhoI双酶切后，胶回收N基因和载体片段进行连接，构建真核表达质粒pIRES－N/DsRed。以pDNAIL－18质粒为模板，PCR获取禽源IL－18基因。将IL－18、pIRES－N/DsRed质粒用BamHI和NotI双酶切后，胶回收IL－18基因和载体片段进行连接，构建了一种禽传染性支气管炎病毒中国分离株SAIBk株N基因与禽IL－18基因共表达DNA疫苗pIRES－N/IL18。该疫苗可用于预防禽传染性支气管炎。
种禽传染性支气管炎病毒基因 il 18 表达 dna 疫苗 pires il18

[发明专利]一种禽传染性支气管炎病毒M基因与禽IL－2基因共表达DNA疫苗pIRES－M/IL2-CN200810044943.9无效
发明人：王红宁;阳泰;张毅;李玉玲;唐梦君;夏青青;曾瑜虹 -专利权人：四川大学
申请日： 2008-03-11 - 公布日： 2008-08-06 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及动物医药生物工程研究领域，是一种禽传染性支气管炎病毒M基因与禽IL－2基因共表达DNA疫苗pIRES－M/IL2。本发明将pIBVM、pIRES－EGFP/DsRed质粒用NheI和XhoI双酶切后，胶回收M基因和载体片段进行连接，构建真核表达质粒pTRES－M/DsRed。以pDNAIL－2质粒为模板，PCR获取禽源IL－2基因。将IL－2、pIRES－M/DsRed质粒用BamHI和NotI双酶切后，胶回收IL－2基因和载体片段进行连接，构建了一种禽传染性支气管病毒中国分离株SAIBk株M基因与禽IL－2基因共表达DNA疫苗pTRES－M/IL2，该疫苗可用于预防禽传染性支气管炎。
种禽传染性支气管炎病毒基因 il 表达 dna 疫苗 pires il2

[发明专利]人细胞系中重组人蛋白质的无血清稳定转染和生产-CN200680023280.1无效
发明人：卡罗拉·施罗德;卡特伦·韦格曼;丁海燕 -专利权人：奥克塔法马股份有限公司
申请日： 2006-06-29 - 公布日： 2008-07-30 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及无血清生产永生化人细胞系的改进方法，所述细胞系在无血清条件下稳定转染了带有编码目的蛋白的基因的特定载体。另外，本发明涉及通过所述方法获得的生产细胞系，使用所述生产细胞系生产所述目的蛋白的方法以及自身携带目的基因的特定载体。
细胞系重组蛋白质血清稳定转染生产

[发明专利]一种抑制core1 β1－3半乳糖基转移酶的shRNA表达载体的构建方法及应用-CN200610019901.0有效
发明人：章晓联;周霞 -专利权人：武汉大学
申请日： 2006-08-03 - 公布日： 2008-06-25 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了一种抑制corel β1－3半乳糖基转移酶载体的shRNA真核表达载体的构建方法及应用，其步骤是根据Genebank提供的Corel beta1，3－galactosyltransferase的基因序列，选取一段21nt的核苷酸序列作为靶序列，设计并合成引物，通过引物退火，连接至载体psilencer1.0－U6，得到真核表达载体pu6－shRNAe，将pu6－shRNAe经肌肉注射至Balb/C小鼠，能显著降低小鼠T细胞活性，抑制小鼠免疫功能，该质粒在制备治疗或预防移植排斥反应、抑制T细胞活性的药物中应用前景广泛。
一种抑制 core1 半乳糖转移酶 shrna 表达载体构建方法应用

[发明专利]通用型高效真核表达载体p3I－GFPN及采用该载体构建的抗乳腺炎的转基因载体-CN200710019050.4有效
发明人：孙达权;陈兴启;张涌;刘凤军;杨鹭;张东 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2007-11-12 - 公布日： 2008-05-28 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了一种通用型高效真核表达载体p3I－GFPN及采用该载体构建的抗乳腺炎的转基因载体，本发明构建的抗乳腺炎转基因载体pCMV/CSN2－hLY－hIFA，在乳腺细胞中能高水平表达绿色荧光蛋白，在泌乳期的乳腺细胞中，由于CSN2的启动子发挥了启动作用，使转pCMV/CSN2－hLY－hIFA的乳腺细胞分泌大量的人溶菌酶和人干扰素A，在通过乳汁分离获得目的蛋白的同时又能较好的防治家畜乳腺炎。
通用型高效表达载体 p3i gfpn 采用构建乳腺炎转基因

[发明专利]NF－κB位点缺失的DC－SIGN启动子真核质粒的构建方法-CN200710156502.3无效
发明人：吴南屏;许利军;靳昌忠 -专利权人：浙江大学
申请日： 2007-11-06 - 公布日： 2008-05-21 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了NF－κB位点缺失型DC－SIGN启动子真核质粒的构建方法。通过设计用EcorI酶切位点替代NF－κB位点的DC－SIGN启动子NF－κB位点上下两端引物，将DC－SIGN启动子报告质粒重的启动子序列分两端扩增，再通过酶切、连接及PCR扩增等方法重新得到NF－κB位点缺失的DC－SIGN启动子片段，将该片断插入pGL3－Basic质粒，成功构建了NF－κB位点缺失型DC－SIGN启动子真核质粒。通过与pGL3－Basic空质粒，DC－SIGN启动子质粒DSPGB和阳性对照质粒pGL3－Control在各种PMA、IL－4刺激情况下的活性进行比较，证实了所构建真核质粒NF－κB位点的缺失。
nf 缺失 dc sign 启动子核质构建方法