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[发明专利]一种包含弱化的SV40启动子/二氢叶酸还原酶表达元件的真核表达载体及其构建方法-CN201210545335.2无效
发明人：陈勇;蒋琳;陆俭;雷清;马亚茹;李刚 -专利权人：兰州生物制品研究所有限责任公司
申请日： 2012-12-14 - 公布日： 2014-06-18 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明目的是提供一种能够方便、高效筛选高表达克隆的真核表达载体。本发明的载体以pBudCE4.1载体为基础改构获得，其中基础载体上肽链延长因子基因启动子(P_ER-1α)及其下游的多克隆位点被弱化的SV40启动子及其下游的二氢叶酸还原酶基因构成的表达元件替换；基础载体上巨细胞病毒早期启动子(P_CMV)下游的多克隆位点被新的多克隆位点替换。
一种包含弱化 sv40 启动子二氢叶酸还原酶表达元件载体及其构建方法

[发明专利]一种基因敲除疟原虫的建立方法-CN201210595231.2无效
发明人：刘权兴;谭章平;戴纪刚;徐文岳 -专利权人：徐文岳;戴纪刚;谭章平;刘权兴
申请日： 2012-12-31 - 公布日： 2014-06-11 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及基因敲除技术，尤指一种基因敲除疟原虫的建立方法，具体包括以下步骤：(a)构建线性化的基因敲除质粒；(b)疟原虫成熟裂殖体的培养；(c)基因敲除质粒(线性化)转染；(d)基因敲除疟原虫的鉴定。本发明采用基于PCR方法的三步法扩增获得线性化的基因敲除质粒，比传统的酶切连接方法更快速，尤其是对质粒中多片段的插入更有优势。本发明的转染技术，高效、省时，转染效率可达到10^-2-10^-3。
一种基因疟原虫建立方法

[发明专利]一种采用玻璃珠法转化衣藻的实验方法-CN201310535542.4在审
发明人：刘军 -专利权人：刘军
申请日： 2013-11-04 - 公布日： 2014-04-30 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了一种采用玻璃珠法转化衣藻的实验方法。步骤如下：首先，将目的衣藻培养至其对数生长期；然后取3-5好身体更的培养液进行预处理，即首先将其进行离心处理，用0.5毫升的转化也对其进行悬空处理；然后加入烤箱中烘干，高温杀菌；加入1-2ug的质粒；充分振荡、摇匀；暗处培养至少24小时；即可进行染色验镜；其中所述质粒需要转入到莱茵衣藻硝酸还原酶缺陷型突变物种中；所述振荡，时间不能超过5分钟，需要瞬间剪切。本发明的有益效果是，成本较低、重复性好，转化效率低，整合基因的拷贝数不高，可以获得比较成功的表达。
一种采用玻璃珠转化实验方法

[发明专利]用于在真核生物中调控基因表达或检测和控制DNA座位的构建体和方法-CN201280025347.0无效
发明人：克斯廷·拜斯特里奇;弗兰克·加拉多;大卫·莱恩;耐莉·杜巴里 -专利权人：国家科研中心
申请日： 2012-03-23 - 公布日： 2014-04-16 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及基于来源于细菌质粒和染色体DNA的分离系统的序列的构建体，如真核表达载体、融合蛋白和编码该蛋白的多聚核苷酸；本发明还涉及用所述构建体转化或表达所述构建体的真核细胞。本发明还涉及其在调控基因表达，和/或在检测和控制真核细胞中感兴趣的基因组DNA座位的动态学、定位或代谢中的应用。
用于生物调控基因表达检测控制 dna 座位构建方法

[发明专利]海洋球石藻真核表达载体的构建方法-CN201310626234.2无效
发明人：刘静雯;蔡慧农;蔡艺钦 -专利权人：集美大学
申请日： 2013-11-29 - 公布日： 2014-03-19 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：海洋球石藻真核表达载体的构建方法，涉及一种海洋微型浮游植物。提供一种海洋球石藻真核表达载体的构建方法，构建的真核表达载体能够运用于对海洋球石藻体内代谢途径研究、作为构建高产神经酰胺基因工程藻株的基础载体。通过构建海洋球石藻真核表达载体，作为微藻生物技术的工具，用于研究海洋球石藻机体代谢途径等问题，并为构建高产神经酰胺基因工程藻株提高基础载体。可用于海洋球石藻合成代谢途径的调控过程研究，即通过利用微藻生物技术阻断或修饰其代谢途径，构建高产神经酰胺海洋球石藻基因工程藻株，以达到神经酰胺的大量积累，为寻找一条新的生产神经酰胺的天然途径奠定基础。
海洋球石藻真核表达载体构建方法

[发明专利]一种胃黏膜上皮细胞ATP4B启动子驱动的SV40T-GFP真核表达载体-CN201210232385.5无效
发明人：范忠泽;王金玉;孙珏;李琦;赵成根;张隆;殷佩浩;李大力;叶乃菁 -专利权人：上海中医药大学附属普陀医院
申请日： 2012-07-06 - 公布日： 2014-03-12 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：发明公开了一种胃黏膜上皮细胞ATP4B启动子驱动的SV40T-GFP真核表达载体，是包含ATP4B启动子序列、SV40T基因序列、以及携带绿色荧光蛋白GFP基因序列的载体质粒DNA序列的基因融合重组质粒；该真核表达载体通过以下步骤构建：步骤1，克隆ATP4B启动子序列；步骤2，将步骤1所得的ATP4B启动子序列插入携带GFP基因序列的载体质粒中，并进行验证；步骤3，将SV40T基因序列插入步骤2所得的携带ATP4B启动子序列和GFP基因序列的载体质粒，并进行酶切鉴定和测序。本发明提供的胃黏膜上皮细胞ATP4B启动子驱动的SV40T-GFP真核表达载体，对细胞无损伤，且具有经济简便的优点，并可以为进一步研究胃癌发生机制及开展胃癌的诊断与基因治疗奠定提供研究对象，奠定实验基础。
一种黏膜上皮细胞 atp4b 启动子驱动 sv40t gfp 表达载体

[发明专利]对转染质粒进行制备的方法-CN201310525136.X无效
发明人：徐丽 -专利权人：徐丽
申请日： 2013-10-31 - 公布日： 2014-02-26 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了对转染质粒进行制备的方法。步骤如下：首先对受体菌进行培养，使其在37摄氏度的环境下振荡培养1-2小时；然后制备感受态细胞，弃上清，悬浮细胞放置冰箱中保存备用；将摇匀后的感受态细胞悬液进行转化，其后在35摄氏度的环境下正面朝上的放置半小时，倒置培养12-13小时；最后进行质粒的抽提，先小提后大提，其中大提的时候，只需要离心一次，且应去除壁上的所有乙醇；所述大提过程中，加入的乙醇为75%-85%；转化的时候，需要加入36摄氏度预热的LB液体培养基。本发明的有益效果是，与预期的结果一致，经抗性筛选后可以获得稳定表达的细胞，而且为将来建立转基因的核供体提供了良好的体细胞。
转染质粒进行制备方法

[发明专利]一种可持续光合产氢的转调控miRNA基因藻及其构建方法-CN201310541659.3在审
发明人：胡章立;李辉;庄晓珊;张立;舒龙飞 -专利权人：深圳大学
申请日： 2013-11-05 - 公布日： 2014-02-12 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明是从绿藻miRNAs文库中筛选或针对影响光合效率的绿藻功能基因设计调控miRNAs，构建能够通过光强或温度等手段诱导表达调控miRNAs的转基因藻，以miRNAs对其靶基因的抑制作为手段，间断调控绿藻光合系统II的活性，控制藻细胞内的低氧环境，从而使绿藻细胞能够持续产氢；以上述方法构建的转调控miRNA基因藻在产氢过程中不需要交替更换培养基，从而克服了现有绿藻为了持续产氢需要交替更换培养基从而造成其生长和产氢能力大大下降的缺陷，具有产业化应用前景。
一种可持续光合转调 mirna 基因及其构建方法

[发明专利]构建特异性启动子的方法-CN201280012910.0有效
发明人：迈克尔·L·罗伯茨 -专利权人：塞普洛麦克斯有限公司
申请日： 2012-01-25 - 公布日： 2013-12-04 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本申请涉及用于设计针对基因选择性表达之启动子的系统。根据特定方法选择由此鉴定的转录调控元件，并且用于产生转录调控元件文库，其随后用于构建特异性启动子，尤其是组织特异性启动子。
构建特异性启动子方法

[发明专利]旋毛虫肌幼虫ES抗原基因疫苗及其制备方法-CN201310040669.9有效
发明人：杨桂连;王春凤;杨文涛;刘高升;赵葛 -专利权人：吉林农业大学
申请日： 2013-02-03 - 公布日： 2013-10-16 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了旋毛虫肌幼虫ES抗原基因疫苗及其制备方法，将旋毛虫肌幼虫43ku、45kuES蛋白基因，分别插入pVAXⅠ真核表达载体中，并按1：1的比例，制备可用于预防旋毛虫感染、提高机体减虫率的联合重组DNA疫苗，经小鼠后肢肌肉注射免疫三周后，攻虫2000条，减虫率可达76.65%，小鼠舌部组织虫卵数明显减少。
旋毛虫幼虫 es 抗原基因疫苗及其制备方法

[发明专利]一种高效克隆及表达的微藻叶绿体载体及其应用-CN201310263325.4无效
发明人：李宏业;谢伟红;朱聪聪;杨维东;刘洁生 -专利权人：暨南大学
申请日： 2013-06-27 - 公布日： 2013-10-16 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效克隆及表达的微藻叶绿体载体及其应用。本发明的微藻叶绿体载体包括同源重组序列trnI、同源重组序列trnA、启动子PrbcL、终止子TrbcS、上游XcmI序列和下游XcmI序列，上游XcmI序列和下游XcmI序列引入启动子PrbcL和终止子TrbcS之间，形成了目的基因克隆位点，同源重组序列trnI在启动子PrbcL的上游，同源重组序列trnA在终止子TrbcS的下游。本发明采用微藻来源的启动子和终止子来调控目的基因的表达，使目的基因在微藻叶绿体中获得高效表达。
一种高效克隆表达叶绿体载体及其应用

[发明专利]pGreen Max1真核表达载体及其制备方法-CN201310268113.5有效
发明人：李大伟;徐维果;武正华;金龙 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2011-04-20 - 公布日： 2013-09-18 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及一种的是分子生物技术领域的pGreen Max1真核表达载体及其制备方法。由Mex、IRES-EGFP片段和真核表达载体重组获得序列1，序列1共计7976bp，其中在第1769bp-2415bp之间插入了含有647bp的Mex片段，在第3120bp-4428bp之间插入了含有1309bp的IRES-EGFP序列；制备方法包括：设计引物从质粒中通过PCR的方法克隆得到Mex，并将PCR产物经过SmaI位点定向插入到表达载体中，并经过BamHI和NotI双酶切将IRES-EGFP插入到载体中，构建重组的pGreen Max真核表达载体。本发明载体作为在真核细胞中获取目的蛋白或抗体的应用，并为高产哺乳动物细胞株的筛选提供蛋白表达及筛选的标记。
pgreen max1 表达载体及其制备方法

[发明专利]阻断HIV-1膜融合的小环型DNA重组载体及其应用-CN201210048534.2有效
发明人：田波;潘煦文;孟颂东 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2012-02-28 - 公布日： 2013-09-11 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明提供一种能真核外分泌表达HIV-1膜融合抑制蛋白HR212的小环型DNA重组载体，其包含编码HR212的核苷酸序列和小环DNA载体。本发明还提供阻断HIV-1膜融合过程的小环型DNA基因治疗剂，其包含能真核外分泌表达HIV-1膜融合抑制蛋白HR212的小环型DNA重组载体，其有效成分是编码七肽重复三螺旋蛋白HR212的核苷酸，该核苷酸通过小环型DNA载体方式，转染真核细胞后，在细胞内表达并通过外分泌或者细胞外膜表达方式释放到细胞外，通过阻断病毒进入宿主细胞过程，发挥抑制HIV-1病毒感染的作用。本发明还提供编码七肽重复三螺旋蛋白HR212的小环型DNA重组载体在制备用于抗HIV-1的感染的基因治疗剂中的应用。
阻断 hiv 融合小环 dna 重组载体及其应用

[发明专利]一种抑癌肽基因重组及其抗肿瘤应用-CN201310045862.1有效
发明人：李晓萌;姜春娃;赵兵;秦辉;王娟婧 -专利权人：东北师范大学
申请日： 2013-02-05 - 公布日： 2013-05-22 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明是基于肿瘤发生特点和治疗难点，通过抗肿瘤基因治疗途径发明一段重组多肽，证明其具有抗肿瘤的应用价值，并提供一段抑癌肽的特异的蛋白序列和核酸序列。利用生物工程技术基因重组一段35个氨基酸（aminoacid）多肽对应的DNA序列到pcDNA3.1真核表达载体。细胞学和小鼠成瘤模型实验表明此重组多肽具有抑制肿瘤细胞活性和抑制小鼠成瘤模型的发生与生长的重要抗癌功能。发明为肿瘤治疗开发新的靶点提供实验依据，对于应用于肿瘤的临床治疗具有十分重要的开发应用前景。
一种抑癌肽基因重组及其肿瘤应用

[发明专利]一种通过设计多克隆位点来构建真核表达载体的方法-CN201210437268.2无效
发明人：闫文朝;韩利方;钱伟锋;王天奇;丁轲;李小军 -专利权人：河南科技大学
申请日： 2012-11-06 - 公布日： 2013-04-24 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种通过设计多克隆位点来构建真核表达载体的方法。本发明通过将真核生物基因启动子、转录终止调控序列、筛选标记基因、外源目的基因和原始骨架载体序列均没有的酶切位点连接在一起，然后再克隆到不含多克隆位点的原始骨架载体上，最后利用DNA重组技术分别将真核启动子、转录终止调控序列、筛选标记基因和外源目的基因插入到含有目的酶切位点序列的骨架载体上，获得真核表达载体。本方法不仅灵活实用，适合于构建所有简单和复杂的真核表达载体，而且克服了原始骨架载体上的固有多克隆位点不能满足要求的缺点；在确定了合适的酶切位点后，后续载体构建工作快捷、高效，加快了实验室真核生物基因功能研究的进程。
一种通过设计克隆位点来构建表达载体方法