[发明专利]外表面蛋白质及其基因和用途

说明书

发明领域

该项发明是关于外表面蛋白质的鉴定及其基因和用途，尤其是涉及在免疫治疗和药物筛选上的应用。

发明背景

B组链球菌(GBS)也被称为无乳链球菌，是各种病的病原体。特别是，GBS可引起：

早期发作新生期感染

该感染通常开始于子宫，导致新生儿严重的败血病和肺炎，如果不能及时治疗将其致死，即使得到治疗也会有10-20％的死亡率。

晚期发作新生期感染

该感染多发于婴儿刚出生至大约3个月期间，可致败血病，90％的病例伴发脑膜炎。其它病灶性感染包括脑膜炎、脓毒性关节炎、脓肿和眼内炎。

成人感染

该感染似乎越来越常见且最频繁地发生于刚生育过婴儿的、年长的、无免疫应答的女性身上。其特征为败血病和病灶性感染，包括脑膜炎、脓毒性关节炎、脓肿和眼内炎。

尿道感染

GBS是尿道感染的成因，在妊娠期的所有感染中约占10％。

家畜感染

GBS引起奶牛的慢性乳腺炎。导致产奶量下降，因此具有值得注意的经济重要性。

虽然GBS感染可用抗生素治疗，但免疫学的方法是优选的。因此人们希望找到一种能被用于有治疗效果的疫苗中的免疫原。

发明概要

本发明基于在GBS中的一系列基因的鉴定，以及相关的生物体，该生物体的产物可能与其外表面相关联且因此可被用作免疫治疗的靶。

根据本发明的一个方面，肽由包括任意的已被鉴定为MS4、MS10、MS11、MS14和MS16的可得自GBS的基因，或其同源物或功能性片段的操纵子所编码。此种肽适合用于治疗，例如当被分离后。

此处所用的术语“功能性片段”是指一部分保留整个基因或肽活性的基因或肽。例如肽的功能性片段可用做抗原决定因子，在疫苗或抗体生产方面颇有用处。

基因片段可用于编码活性肽。另外，该基因片段在基因疗法、体内野生型基因定位来发挥治疗作用方面有实用。

本发明的肽可包含确定的任一氨基酸序列，如SEQ ID NOS.2、4、6、8、10和12，或包含上述序列的功能性片段。

因为位于细胞外或细胞表面的位置，本发明的肽可为生产抗GBS治疗上有效的疫苗的候选物。“治疗上有效的”是指包括疫苗的预防作用。例如，疫苗可包含本发明所述的肽或用于其表达的工具以治疗感染。

这种疫苗可在妇女怀孕前或怀孕期间给药来保护母亲和新生儿免受GBS感染。

根据本发明的另一方面，此肽或基因可用于筛选潜在的抗微生物药物或毒性检测。

本发明的另一个方面是在此处鉴定的任意产物的用途，用于与GBS菌株感染相关病症的治疗或预防。

虽然已经描述了此蛋白质用于病人的治疗，但该产物的兽医用途也被视为在本发明的范围之内。尤其是，该肽或疫苗可被用于慢性乳腺炎的治疗，特别是对奶牛的治疗。

发明描述

本发明与B组链球菌菌株M732有关，然而所有的GBS菌株和许多其它的细菌菌株都可能包含相关的肽或蛋白质，它们都有与M732的肽同源的氨基酸序列。可能含有此肽的生物体，包括但不仅限于此：肺炎链球菌，酿脓链球菌，猪链球菌，米氏链球菌，C组和G组链球菌，还有肠球菌。按照描述GBS的相同方法，可以开发出这些菌株中的相应疫苗。

优选地，用于生产疫苗的肽与在此鉴定的肽有超过40％的序列相似性，优选可以超过60％，最优选可多于80％的序列相似性，例如95％相似性。

在鉴定出本发明的一个基因后，可以用此基因序列在别的微生物中确定同源性。以此方式还可以确定别的微生物是否有相似的外表面产物。通过在现存的数据库例如：EMBL或Genbank中搜索，可以确定序列的同源性。

本发明的肽或蛋白质可通过本领域已知的方法被纯化和分离。特别是，确定基因序列后，可以用重组技术在合适的宿主中表达基因。活性片段和同源物可以被鉴定出来，并在治疗领域中应用。例如，肽或其活性片段可在疫苗中作为抗原决定簇，来引起免疫答应。其也可以被用于抗体的制备，用于被动免疫或诊断应用。合适的抗体包括单克隆抗体或其片段，包括单链fv片段。制备抗体的方法对本领域的技术人员来说是显而易见的。

基于减毒微生物的疫苗的制备是本领域技术人员已知的。如需要或希望的话，疫苗组合物可与合适的载体或佐剂如明矾一起配制，并用于治疗，来提供抗B组链球菌或其它相关微生物的有效免疫作用。疫苗配剂的制备对本领域的技术人员来说是显而易见的。