[发明专利]医药组合物

说明书

本发明涉及水蛭素的含水配制品，特别是涉及贮存配制品。

水蛭素，作为一种天然存在于水蛭（Hjrudo medicinalis）中的抗凝血剂，并不是单一的多肽，而是一类至少由四种肽组成的有等同作用的多肽，它们分别称为水蛭素变异体1（HV1）、水蛭素变异体2（HV2）（参见欧洲专利申请No.158 564）、水蛭素变异体3（PA）（参见PCT申请No.86/03493）和“脱-（Val）₂-水蛭素”（参见欧洲专利申请No.158 986）。这些变异体在结构上彼此差异在于氨基酸数目不同（具体的说，HVI的N末端是Val-Val-Tyr，HV2和HV3的N末端是Thr-Tyr），但它们的共有特征是在N末端有疏水氨基酸积聚，在C末端有极性氨基酸积聚，酷氨酸残基（Tyr⁶³）作为硫酸单酯存在、有三个二硫桥键以及都有抗凝血活性。

在过去的几年里，已克隆并在微生物宿主中表达了编码水蛭素变异体的CDNA和合成基因。虽然表达产物在Tyr⁶³位缺少硫酸单酯基团并因此被称为“脱硫酸水蛭素”，但已证明它们表现有与天然硫酸化水蛭素差不多相同的生物学活性。已在大肠杆菌中（欧洲专利申请No.158 564和168 342）和啤酒酵母中（欧洲专利申请No.168 342、200 655、225 633、252 854和341 215）表达了脱磷酸水蛭素变异体HV1。同样，已在大肠杆菌中（欧洲专利申请No.158 564）和啤酒酵母中（欧洲专利申请No.200 655，PCT申请No.86/01224）表达了脱硫酸水蛭素HV2，并在大肠杆菌中（欧洲专利申请No.158 986）表达了脱-（Val）₂-脱硫酸水蛭素。

根据本发明，术语“水蛭素”意欲包括分别在文献中描述的水蛭素、脱硫酸水蛭素、水蛭素变异体或脱硫酸水蛭素变异体或其突变体，且特别是可从含有编码脱硫酸水蛭素或其突变体之DNA的被转化的微生物菌株得到的脱硫酸水蛭素或其突变体。例如，这些脱硫酸水蛭素是脱磷酸水蛭素变异体HV1、HV1修饰的（ a、b）、HV2、HV2修饰的（a、b、c）、HV3和脱-（Val）₂-脱硫酸水蛭素的变异体。

优选的脱硫酸水蛭素具有下列结构式（SEQ  ID  NO：1）：

其中

a）27、36和47位的Xaa各自是Lys，51位的Xaa是His且62位的Xaa是肽残基Glu-Tyr-Leu-Gln（MV1），或

b）27位的Xaa是Ile或Glu，36、47、51和62位的Xaa是如a）中限定的氨基酸（HV1修饰的a），或

c）36位的Xaa是Ile或Glu，且27、47、51和62位的Xaa是如a）中限定的氨基酸（HV1修饰的a），或

d）47位的Xaa是Ile或Glu，且27、36、51和62位的Xaa是如a）中限定的氨基酸（HV1修饰的a），或

e）51位的Xaa是Ieu或Asp，且27、36、47和62位的Xaa是如a）中限定的氨基酸（HV1修饰的a），或

f）62位的Xaa选自Glu-Tyr、Glu-Tyr-Leu、Glu-Asp-Leu-Gln、Glu-Glu-Leu-Gln、Glu-Tyr-Lys-Arg、Glu-Asp-Lys-Arg、Glu-Lys-Leu-Gln、Ser-Phe-Arg-Tys、Trp-Glu-Leu-Arg、Glu-Tyr-Leu-Gln-Pro和Glu-Tyr-Leu-Gln-Arg，且27、36、47和51位的Xaa是如a）中限定的氨基酸（HV1修饰的b），

或具有下列结构式（SEQ  ID  NO：2）：

或具有下列结构式（SEQ  ID  NO：3）：

其中

a）47位的Xaa是Asn，且63位的Xaa是Tyr（HV2），或

b）47位的Xaa是Lys、Arg或His，且63位的Xaa是Tyr（HV2修饰的a），或

c）63位的Xaa是Glu或Asp且47位的Xaa是Asn（HV2修饰的b），或具有下列结构式（SEQ  IN  NO：4）：

或具有下列结构式（SEQ  ID  NO：5）的脱硫酸水蛭素。

（Ⅴ）

HV3和所说HV3之变异体的特征是使一级结构在N末端缩短1或2个氨基酸，或在C末端缩短18、10、9、6、4或2个氨基酸。