[发明专利]一种痘病毒载体疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种痘病毒载体疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：制备原代鸡胚细胞悬液；

S2：痘病毒培养；

将含有0.1~0.5%人血白蛋白和0.1~1.0 mmol/L谷氨酰胺二肽的无血清培养基注入一次性反应袋中，加入细胞悬液，混匀；将病毒感染增强剂加入无血清培养基中，加入病毒悬液，混匀，4℃静置后，将病毒悬液加入至反应袋中，混匀；培养18小时后，灌流培养，培养至68~82小时，终止培养；

S3：痘病毒收获；

终止培养后，弃上清，用PBS清洗后，加入保护剂至-80℃冻结后，在室温溶解，收集溶液，离心收获上清液即为痘病毒原液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1的具体步骤如下：

取发育9~11日龄的鸡胚，去头，剪碎，用胰酶消化，加入等体积含血清的培养基中和胰酶，离心去上清，加入培养基吹打分散细胞，收集悬液即为原代鸡胚细胞悬液。

3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中所述一次性反应袋中装有30 g/L的片状载体。

4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述片状载体为聚酯纤维，呈书页状，载体比表面积为1200 cm²/g。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中将含有人血白蛋白和谷氨酰胺二肽的无血清培养基注入一次性反应袋后，按照1~5×10⁶个细胞/mL加入细胞悬液。

6. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中将病毒感染增强剂加入无血清培养基中，并按0.001~0.01 MOI加入病毒悬液。

7. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中所述4℃静置后，将病毒悬液加入至反应袋中，混匀，培养条件为37±1℃、角度7°、溶氧70%±20%、pH 7.6±0.1。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中保护剂为1~5%质量体积比的蔗糖。

9.权利要求1~8任一项所述的制备方法制备得到的痘病毒载体疫苗。

10.权利要求1~8任一项所述的制备方法或权利要求9所述的痘病毒载体疫苗在制备预防天花的产品中的应用。