[发明专利]一种拟平滑念珠菌微卫星位点及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种拟平滑念珠菌微卫星位点的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

S1、提取拟平滑念珠菌的总DNA；

S2、以所述总DNA为模板，利用荧光标记的引物组在PCR反应体系中进行PCR扩增反应；

S3、对PCR扩增产物中的荧光标记DNA片段进行多态性检测；

所述拟平滑念珠菌微卫星位点为核苷酸序列如SEQ ID NO.1-4所示的拟平滑念珠菌微卫星位点的组合；

所述引物组为核苷酸序列如SEQ ID NO.5-8所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ IDNO.9-12所示的反向引物。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，每20μL的PCR反应体系中含有8-12μL的DNA聚合酶、1-3μL的gDNA、0.2-0.4μL的正向引物和0.2-0.4μL的反向引物；

所述正向引物的浓度为18-22μM，所述反向引物的浓度为18-22μM；

其中，所述正向引物的5’端通过荧光染料进行FAM和/或HEX标记。

3. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增反应的反应程序包括：94℃ 5min，94℃ 30s，60℃ 40s，72℃ 50s，10个循环；94℃ 30s，53℃ 40s，72℃ 50s，27个循环；72℃ 10min；

所述多态性检测包括：利用毛细管电泳检测PCR扩增产物中的荧光标记DNA片段，通过分子量内标确定所述PCR扩增产物的等位片段的位置和相对分子量。

4.一种用于扩增拟平滑念珠菌微卫星位点的引物组，其特征在于，所述引物组为核苷酸序列如SEQ ID NO.5-8所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.9-12所示的反向引物；

所述拟平滑念珠菌微卫星位点为核苷酸序列如SEQ ID NO.1-4所示的拟平滑念珠菌微卫星位点的组合。

5.一种用于检测拟平滑念珠菌微卫星位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含权利要求4所述的用于扩增拟平滑念珠菌微卫星位点的引物组。

6.权利要求1-3中任一项所述的检测方法在拟平滑念珠菌的分子分型、分子溯源、院感监测、群体遗传和系统进化分析中的应用。