[发明专利]一种长杂谷2922种子纯度的InDel标记引物对及其鉴定方法和应用

权利要求书

1.一种长杂谷2922种子纯度的InDel标记引物对，其特征在于，所述标记引物对包括上游引物InDel Re2632F和下游引物InDel Re2632R；

所述上游引物InDel Re2632F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述下游引物InDel Re2632R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种采用权利要求1所述的InDel标记引物对鉴定谷子杂交种长杂谷2922种子纯度的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1，提取样本基因组DNA；

S2，利用InDel标记引物对样本基因组DNA进行PCR扩增；

S3，将S2中获得的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测；

S4，分析S3中的检测结果，杂交种子判断标准为，可以同时扩增出两个亲本特异性序列，然后根据统计结果计算杂交种子纯度，计算公式为：杂合带型数量/有效扩增条带数量*100％。

3.根据权利要求2所述的鉴定谷子杂交种长杂谷2922种子纯度的方法，其特征在于，S1中，样本基因组DNA的提取过程为：叶片液氮速冻后研磨，加入30μL核酸释放剂，离心，将离心后的样品于沸水中煮3-5min，然后将样品离心，吸取上清液，加入无菌水后-20℃保存备用。

4.根据权利要求2所述的鉴定谷子杂交种长杂谷2922种子纯度的方法，其特征在于，S2中，PCR扩增体系为：5.0μL 2×Lightning Taq PCR Mix，1.0μL正向引物，1.0μL反向引物，1.0μL DNA模板，2.0μL灭菌水；

所述的正向引物和反向引物的浓度均为2.0μmol L^-1。

5.根据权利要求2所述的鉴定谷子杂交种长杂谷2922种子纯度的方法，其特征在于，S2中，PCR扩增程序为：94℃预变性3min，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环后，72℃终延伸10min。

6.根据权利要求2所述的鉴定谷子杂交种长杂谷2922种子纯度的方法，其特征在于，S4中，能够同时扩增出序列如SEQ ID NO.3所示的母本特异性序列和序列如SEQ ID NO.4所示的父本特异性序列的样本则为杂交种。

7.一种权利要求1所述的长杂谷2922种子纯度的InDel标记引物对在种子纯度鉴定中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，纯度鉴定样本为长杂谷2922。