[发明专利]细胞模型及其制备方法和应用

说明书

本申请涉及细胞模型及其制备方法和应用，所述制备方法包括含有YFP的基因片段定点敲入至正常细胞的p21基因的终止密码子位置，获得重组细胞后，筛选出p21‑YFP阳性细胞，可以作为对药物进行促衰老副作用的评价；进一步，将重组细胞通过药物诱导衰老后，筛选出的p21‑YFP阳性细胞，可以作为抗衰老药物筛选系统使用。根据本申请制备方法获得细胞模型，通过检测YFP荧光快速、高效的筛选出抗衰老药物或对药物潜在促衰老副作用进行评价。

技术领域

本申请涉及生物医药领域，具体涉及细胞模型及其制备方法和应用。

背景技术

随着人类生活质量的提高，衰老问题已日渐成受到关注，研发具有抗衰老的新药既具有重大社会意义又有巨大商业价值。衰老分为个体衰老、器官衰老、细胞衰老几个水平，个体与器官的衰老最终反应在细胞衰老上，目前，缺乏一种细胞衰老模型可以高效对潜在的抗/促衰药物进行筛选。

发明内容

基于此，本申请有必要提供一种细胞模型，可用于高效地对潜在的抗衰老药物或促衰药物进行筛选。

具体技术方案如下：

一种细胞模型的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

采用CRISPR/Cas9系统将YFP编码基因的序列定点敲入至正常肝细胞的p21基因中，得到重组细胞；

在所述重组细胞中，筛选出p21-YFP阳性细胞，获得细胞模型。

在其中一个实施例中，在所述筛选出p21-YFP阳性细胞的步骤前，还包括用含有药物的培养基诱导培养所述重组细胞衰老的步骤。

可选的，所述药物包括Doxorubicin、Aphidicolin、Hydroxyurea、Etoposide、Decitabine、Trichostatin A、MS-275和Palbociclib中的一种或多种。

所述制备方法制备得到的细胞模型。

所述细胞模型在制备抗衰老药物筛选系统或药物的促衰老副作用的评价系统中的应用。

一种抗衰老药物的筛选方法，所述方法包括使用上述细胞模型对候选物质进行进行抗衰老药物的筛选。

一种药物是否有促衰老副作用的评价方法，所述方法包括使用所述细胞模型对药物进行促衰老副作用的评价。

相对于现有技术，本申请具备如下有益效果：

本申请将包括含有YFP的基因片段定点敲入至正常细胞的p21基因的终止密码子位置，获得重组细胞后，筛选出p21-YFP阳性细胞，可以作为促进衰老药物筛选系统使用；进一步，将重组细胞通过药物诱导衰老后，筛选出的p21-YFP阳性细胞，可以作为抗衰老药物筛选系统使用。根据本申请制备方法获得细胞模型，通过检测YFP荧光快速、高效的筛选出抗衰老药物或促进衰老药物。

附图说明

图1为p21-YFP-Neo细胞系构建，(A)p21-YFP-Neo细胞系构建策略；(B)p21gRNA测序结果；(C)p21 donor质粒图谱；(D)电泳结果：M表示Marker，1表示p21 donor质粒，2表示经过EcoR V酶切之后的p21 donor质粒；

图2为p21-YFP-Neo单克隆细胞系鉴定；

图3为Doxorubicin诱导p21-YFP-Neo细胞系衰老浓度优化结果；

图4为p21-YFP-Neo细胞系衰老的检测，其中DMSO和Doxorubicin分别对p21-YFP-Neo细胞系处理之后，β-半乳糖苷酶染色结果，荧光显微镜下观察p21-YFP的表达；

图5为衰老药筛体系对抗衰老药物验证。

具体实施方式