[发明专利]制备病毒疫苗的方法、培养用于制备疫苗的Vero细胞的方法和培养基

说明书

本发明提出一种制备病毒疫苗的方法、培养用于制备疫苗的Vero细胞的方法和培养基，所述培养用于制备疫苗的Vero细胞的方法包括：(a)对Vero细胞进行基因改造，以便得到基因改造的SDHB基因，(b)将经过基因改造的所述Vero细胞在经过优化的MEM培养基中进行无血清培养，以便获得用于制备疫苗的Vero细胞。通过采用根据本申请实施例的技术方案，能够有效地对经过SDHB基因改造的Vero细胞进行培养，从而进一步可以用于扩增PEDV病毒和制备疫苗。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体的，本申请涉及细胞培养和疫苗领域，本发明涉及制备病毒疫苗的方法、培养用于制备疫苗的Vero细胞的方法和培养基。

背景技术

猪流行性腹泻病毒(学名：Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)，又称猪流行性下痢病毒，是甲型冠状病毒属的一种病毒，可感染猪，造成猪流行性腹泻(porcineepidemic diarrhoea)，其症状包括严重的小肠炎、呕吐、腹泻与脱水等，在新生的小猪中特别严重。PEDV给养猪业造成巨大危害的主要原因是缺少高效的PEDV疫苗，而制备高效疫苗的基本条件是获得高滴度的病毒。

目前生产PEDV疫苗所使用细胞系为Vero细胞，存在培养病毒滴度较低的缺陷。因此，目前关于采用Vero细胞扩增PEDV病毒的手段仍有待改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够有效地扩增PEDV病毒的手段。

在本申请的第一方面，本发明提出了一种培养用于制备疫苗的Vero细胞的方法，其包括：(a)对Vero细胞进行基因改造，以便得到基因改造的SDHB基因，(b)将经过基因改造的所述Vero细胞在经过优化的MEM培养基中进行无血清培养，以便获得用于制备疫苗的Vero细胞，其中，所述基因改造的SDHB基因表达具有下列氨基酸序列的SDHB蛋白：

MAAVVALSLRGALPATTLGGAALQASRGAQTAAAAAPRIKKFAIYRWAPDKAGDAPHAQTYEIDLNKCGPMVLDALIKIKNEIDSTLTFRRSCREGICGSCAMNINGGNTLACTRRIDTNLNKVSKIYPLPHMYVIKDLVPDLSNFYAQYKSIEPYLKKKDESQEGKQQYLQSIEEREKLDGLYECILCACCSTSCPSYWWNGDKYLGPAVLMQAYRWMIDSRDDFTEERLAKLQDPFSLYRCHTIMNCTRTCPKGLNPGKAIAEIKKMMATYKEKKASV(SEQ ID NO:1)，

所述经过优化的MEM培养基是在基础MEM培养基中额外添加下列成分：

M-丙氨酸、L-盐酸精氨酸、L-天门冬氨酸、L-门冬酰胺、L-半胱氨酸盐酸盐一水、L-胱氨酸二盐酸盐、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-盐酸组氨酸一水、L-羟脯氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-盐酸赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、丙氨酰谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES、大豆水解物、酵母提取物、无水磷酸氢二钠、D-无水葡萄糖、还原型谷胱甘肽、七水硫酸亚铁、七水硫酸锌、维生素C、氯化胆碱、肌醇、九水硝酸铁、氯化锂、重组人胰岛素、柠檬酸铁、维生素B12、五水硫酸铜、六水氯化镁、D-生物素、次黄嘌呤、亚油酸、硫辛酸、1，4-丁二胺二盐酸盐、维生素B2、胸苷、对氨基苯甲酸、氯化铝、乙酸钡、六水氯化钴、四水氯化锰、氟化钠、氯化亚锡、氯化镉、二氧化锗、亚硒酸钠、九水偏硅酸钠、氯化镍、偏钒酸铵、胆固醇、维生素E、维生素A醋酸酯、烟酸、2D-脱氧核糖、氢化可的松、EGF和IGF。