[发明专利]制备病毒疫苗的方法、培养用于制备疫苗的Vero细胞的方法和培养基

权利要求书

1.一种培养用于制备疫苗的Vero细胞的方法，其特征在于，包括：

(a)对Vero细胞进行基因改造，以便得到基因改造的SDHB基因，

(b)将经过基因改造的所述Vero细胞在经过优化的MEM培养基中进行无血清培养，以便获得用于制备疫苗的Vero细胞，

其中，

所述基因改造的SDHB基因表达具有下列氨基酸序列的SDHB蛋白：

MAAVVALSLRGALPATTLGGAALQASRGAQTAAAAAPRIKKFAIYRWAPDKAGDAPHAQTYEIDLNKCGPMVLDALIKIKNEIDSTLTFRRSCREGICGSCAMNINGGNTLACTRRIDTNLNKVSKIYPLPHMYVIKDLVPDLSNFYAQYKSIEPYLKKKDESQEGKQQYLQSIEEREKLDGLYECILCACCSTSCPSYWWNGDKYLGPAVLMQAYRWMIDSRDDFTEERLAKLQDPFSLYRCHTIMNCTRTCPKGLNPGKAIAEIKKMMATYKEKKASV(SE ID NO:1)，

所述经过优化的MEM培养基是在基础MEM培养基中额外添加下列成分：

L-丙氨酸、L-盐酸精氨酸、L-天门冬氨酸、L-门冬酰胺、L-半胱氨酸盐酸盐一水、L-胱氨酸二盐酸盐、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-盐酸组氨酸一水、L-羟脯氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-盐酸赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、丙氨酰谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES、大豆水解物、酵母提取物、无水磷酸氢二钠、D-无水葡萄糖、还原型谷胱甘肽、七水硫酸亚铁、七水硫酸锌、维生素C、氯化胆碱、肌醇、九水硝酸铁、氯化锂、重组人胰岛素、柠檬酸铁、维生素B12、五水硫酸铜、六水氯化镁、D-生物素、次黄嘌呤、亚油酸、硫辛酸、1，4-丁二胺二盐酸盐、维生素B2、胸苷、对氨基苯甲酸、氯化铝、乙酸钡、六水氯化钴、四水氯化锰、氟化钠、氯化亚锡、氯化镉、二氧化锗、亚硒酸钠、九水偏硅酸钠、氯化镍、偏钒酸铵、胆固醇、维生素E、维生素A醋酸酯、烟酸、2D-脱氧核糖、氢化可的松、EGF和IGF。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述SDHB基因具有下列核苷酸序列：

CCCTCCGCCCACTCGGGAAACCGGAAGCCGCCTCCCACTCGGTGGCTCCTACGCGGCTAGCGGGTCCTCAGTGGATGCAGGCTGGGCGCCGCGATGTTCGACGGGACATCGGCGGAGAGAGACCTCGGGGTTAAGGGGTGGGGCTGACGTCAAGAGCCAAGATGGCGGCGGTGGTCGCACTCTCCTTGAGGGGCgccTTACCGGCCACAACCCTTGGCGGAGCCgccCTGCAGGCCTCCCGAGGAGCCCAGACAGCTGCAGCCGCAGCTCCCCGTATCAAGAAATTTGCCATCTATCGATGGgctCCAGACAAGGCTGGAGACgctCCTCATATGCAGACTTACGAAATTGACCTTAATAAATGTGGCCCCATGGTATTGGATGCTTTAATCAAGATTAAGAATGAAATTGACTCTACTTTGACCTTCCGAAGATCATGCAGAGAAGGCATCTGTGGCTCTTGTGCAATGAACATCAATGGAGGCAACACTCTAGCTTGCACCCGAAGGATTGACACCAACCTCAATAAGGTCTCAAAAATCTACCCTCTTCCACATATGTATGTGATAAAGGACCTTGTTCCCGATTTGAGCAACTTCTATGCTCAGTACAAATCCATTGAGCCTTATTTGAAGAAGAAGGATGAATCTCAGGAAGGCAAGCAGCAGTATCTGCAGTCCATAGAAGAGCGTGAGAAACTGGACGGGCTCTACGAGTGCATTCTCTGTGCCTGCTGTAGCACCAGCTGCCCCAGCTACTGGTGGAACGGAGACAAATATCTGGGGCCTGCAGTTCTTATGCAGGCCTATCGCTGGATGATTGACTCCAGAGACGACTTCACAGAGGAGCGCCTGGCCAAGCTGCAGGACCCGTTCTCTCTGTACCGCTGCCACACCATCATGAACTGCACAAGGACCTGTCCTAAGGGTCTGAATCCAGGGAAAGCTATTGCAGAAATCAAGAAAATGATGGCAACCTATAAGGAGAAGAAAGCTTCAGTTTAAGTGTTTCCATGCTAAACATGATTTAAAACCAGCTCAGAGCTGAACATAATTTATATCTAATTTGAGTTCCTTTAAAGATCTTGGTTTTCCATGAATACAGCATGTATAATAAAAATTTTAAGAAATAAATGTTATTCTACTTTATTAACAAAAAAA(SEQ ID NO:2)。