[发明专利]一种多黏菌素B的分离纯化方法

说明书

本发明涉及医药领域，特别涉及一种多黏菌素B的分离纯化方法。其中，所述分离纯化方法包括：S1、对硫酸多黏菌素B发酵液进行过滤，获得过滤液；S2、将所述过滤液以HZ‑3B树脂吸附并依次以水和体积浓度为1.0％硫酸溶液洗脱，获得解析液；S3、将所述解析液以UniSil C18反相硅胶填料吸附并依次以乙醇顶洗和乙醇溶液洗脱，获得有效纯化液。本发明所提供的多黏菌素B分离纯化方法所分离纯化得到的成品粉杂质含量低、有效组分总比例高，更接近于标准。

技术领域

本发明涉及医药领域，特别涉及一种多黏菌素B的分离纯化方法。

背景技术

由于现有技术缺乏对多黏菌素B专用性分离技术，因此一般以现有通用技术大孔树脂对多黏菌素B进行分离纯化，如中国专利CN103923190B公开的一种从多黏菌素B的混合组分中分离纯化多黏菌素B1的方法，或在大孔树脂的基础上辅以离子交换色谱，如中国专利CN111100823B所公开的一种硫酸多黏菌素B生产菌株、硫酸多黏菌素B的制备方法及应用，该技术拓展了多粘菌素B生产方法。然而，现有分离方法有效成分组分总比例相对较低，难以符合应用要求。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：提供一种有效组分总比例高的多黏菌素B的分离纯化方法，

为了解决上述技术问题，本发明提供一种多黏菌素B的分离纯化方法，包括：

S1、对硫酸多黏菌素B发酵液进行过滤，获得过滤液；

S2、将所述过滤液以HZ-3B树脂吸附并依次以水和体积浓度为1.0％硫酸溶液洗脱，获得解析液；

S3、将所述解析液以UniSil C18反相硅胶填料吸附并依次以乙醇顶洗和乙醇溶液洗脱，获得有效纯化液。

本发明的有益效果在于：本发明所提供的多黏菌素B的分离纯化方法可有效提高所分离得到产品中有效成分组分总比例和纯度，所获得的的多黏菌素B更接近于标准品。同时，可有拓展多黏菌素B的分离纯化领域，为制备更高纯度产品，或制备更高质量标准品提供实验基础。

附图说明

图1所示为本发明的成品图谱。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

一种多黏菌素B的分离纯化方法，包括：

S1、对硫酸多黏菌素B发酵液进行过滤，获得过滤液；

S2、将所述过滤液以HZ-3B树脂吸附并依次以水和体积浓度为1.0％硫酸溶液洗脱，获得解析液；

S3、将所述解析液以UniSil C18反相硅胶填料(粒径50μm，苏州纳微科技有限公司)吸附并依次以乙醇顶洗和乙醇溶液洗脱，获得有效纯化液。

在一种实施方式中，所述过滤为：将所述硫酸多黏菌素B发酵液以陶瓷膜过滤浓缩至其体积一半后，加水顶洗过滤至总滤液体积为所述硫酸多黏菌素B发酵液体积2～5倍时，停止过滤并收集过滤液。其中，所述陶瓷膜的孔径优选为0.01μm。

优选地，在加水顶洗过程中保持加水量和过滤流量一致。在一种可选的实施方式中，过滤流量保持在1L/min。

在一种实施方式中，所述S2为：将所述过滤液以0.5BV/h的流速过HZ-3B树脂，吸附完成后以水清洗10BV体积，再用体积浓度为1.0％的硫酸溶液进行洗脱13BV，从切换洗脱剂时开始收集，即在水清洗完成后以体积浓度为1.0％的硫酸溶液进行洗脱时开始收集，获得解析液。

在一种实施方式中，在S2中所述过滤液的pH为5.5～5.7。

在一种实施方式中，在S3中，所述解析液的pH为6.4～6.7。