[发明专利]厌氧菌分离培养基及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种厌氧菌分离培养基及其制备方法和应用，属于微生物培养技术领域。本发明为提高苛养难养厌氧菌的分离种类和数量，同时提高酿酒副产物黄水的利用价值，以改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基为基础，加入过滤除菌后的黄水，模拟白酒窖池的特殊酿造生境，得到一种厌氧菌分离培养基，其可有效提高白酒窖池中厌氧菌分离的种类和数量，并实现了酿酒副产物黄水的回收利用。

技术领域

本发明属于微生物培养技术领域，具体涉及一种厌氧菌分离培养基及其制备方法和应用。

背景技术

浓香型白酒采用独特的泥窖发酵，大曲、窖泥和酒醅中丰富的微生物共同发酵相互作用，产生己酸乙酯等香味物质，是造就其特殊风味的关键，也是浓香型白酒与其他香型白酒的最大区别。浓香型白酒窖池菌群结构的研究，对于探究微生物相互作用和风味物质形成之间的关系至关重要，但其中富含的苛养难养的厌氧微生物难以分离。

浓香型白酒酿造过程中，微生物分解代谢产生大量的游离水，游离水向窖池底部渗透，形成了棕黄色或者褐色的液体，被称之为黄水。黄水中富含淀粉和蛋白质分解产生的葡萄糖、氨基酸等营养物质，也含有有机酸、单宁、香味前体物质等微生物代谢产物。但目前将黄水用于制备培养基的报道较少。

平板培养法是研究浓香型白酒酿造过程中菌群结构最直接的方法，然而由于分离生境复杂，普通的培养基难以有效分离其中苛养难养的厌氧微生物。

发明内容

本发明为提高苛养难养厌氧菌的分离种类和数量，同时提高酿酒副产物黄水的利用价值，提高了一种厌氧菌分离培养基及其制备方法和应用，本发明培养基特别适合浓香型白酒窖池微生物的分离培养。

为实现上述目的，本发明首先提供了一种厌氧菌分离培养基的制备方法，其包括：

将改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基以体积比1±0.1：1±0.1进行配比(即混合均匀)，经灭菌、冷却后，加入过滤除菌后的黄水，混匀，得厌氧菌分离培养基；其中，控制所述改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基的体积之和与所述过滤除菌后的黄水的体积的比例为1：1％～15％。

优选的，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，控制所述改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基的体积之和与所述过滤除菌后的黄水的体积的比例为1：3％～10％。

更优选的，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，控制所述改良PYG培养基和蛋白瘤胃球菌培养基的体积之和与所述过滤除菌后的黄水的体积的比例为4～6％。

其中，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，所述过滤除菌后的黄水为：黄水通过0.22微米无菌滤膜过滤所得。

其中，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，所述灭菌为121℃灭菌15min或115℃灭菌20min。

其中，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，所述冷却为冷却至50～55℃。

其中，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，所述改良PYG培养基的配方为：

胰蛋白胨5.0g/L，蛋白胨5.0g/L，酵母粉10.0g/L，牛肉膏5.0g/L，葡萄糖5.0g/L，K₂HPO₄2.0g/L，吐温80 1.0mL/L，NaHCO₃ 0.4g/L，NaCl 0.08g/L，KH₂PO₄ 0.04g/L，MgSO₄·7H₂O0.02g/L，CaCl₂·2H₂O 0.01g/L，刃天青1.0mg/L，氯化血红素5mg/L，维生素K1 1mg/L，半胱氨酸盐酸盐0.5g/L和琼脂15.0g/L，pH为7.2。

其中，上述厌氧菌分离培养基的制备方法中，所述蛋白瘤胃球菌培养基的配方为：