[发明专利]一种用于对混合体液进行鉴定的复合扩增体系、引物及其试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于对混合体液进行鉴定的复合扩增体系、引物及其试剂盒。复合扩增体系包括如SEQ ID NO.1～48所示的引物序列，可同时扩增如下STR位点：HBB、HBA、PPBP、HBD、ALAS2、AMI、PRM1、MSMB、KLK3、SEMG1、KLK2、PRM2、HTN3、STATH、MUC7、KRT13、KRT4、SPRR2A、MYOZ1、HBD1、CYP2B7P、β2‑MG、UBC以及PGK。本发明可同时扩增四种人类体液斑(血液、精液、唾液、阴道分泌物)多个特异标记物以及管家基因mRNA，可以快速准确地进行人类特征标记物分析，进而鉴别法医常见体液斑类型，帮助正确识别案件现场生物检材的组织来源。

技术领域

本发明属于法医学检测鉴定技术领域，具体涉及一种用于对混合体液进行鉴定的复合扩增体系、引物及其试剂盒。

背景技术

近十多年来，在法医学领域DNA分析技术有助于在罪犯和作案现场之间找到关联证据，缩小嫌犯范围，尽管DNA分析方法作为鉴定刑事案件的重要辅助手段已经得到普遍认可，但由于案件形式的多样化，仅靠DNA的检验方法已不能满足所有刑事案件的需要。而正确识别现场生物检材的组织来源有助于推断案件的发生过程及现场重建，DNA的STR分型检测技术可判定常见的生物检材如唾液、血液和精液等的个体来源，但因DNA的同一性，依靠现有DNA检测试剂盒无法区分来自同一个体的不同体液类型。

不同组织和体液均含有其独特的蛋白或酶分子。传统的法医物证学主要通过一些酶促反应或免疫学试验检测这些特定蛋白分子，从而筛选和确证各种体液和组织。这些传统鉴定方法通常比较简便、快速，对血痕、精斑等少数体液组织具有较高的特异性和准确性，但亦存在一定局限。首先，部分体液和组织间存在交叉反应，使其特异性降低；其次，传统鉴定方法会对检材造成破坏，且不同组织鉴定方法难以兼容，故需消耗额外的检材，这对量少的生物检材极为不利；再次，因酶蛋白不及DNA稳定，致使陈旧或腐败降解检材检测困难。此外，传统方法结果判定大多依赖操作者的水平和经验，增加了人为因素造成误判的风险。

目前，法医学对组织来源鉴定广泛使用的分子标志主要有信使RNA(messengerRNA，mRNA)、微RNA(MicroRNA，miRNA)、DNA甲基化三种；此外，微生物菌群也可用于体液来源鉴定。因此针对体液斑类型的检测主要有下列几种方法：

1.微小RNA分析法

微小RNA(microRNAs，miRNAs)是一类内源性的非编码小分子RNA，长度范围在16-29nt，平均长度22nt，广泛存在于各种真核细胞中。miRNAs通过直接剪切靶mRNA，或者通过完全/不完全与靶mRNAs3'非翻译区互补结合抑制靶mRNA的翻译，从而参与调节细胞生长发育、分化、凋亡、衰老、疾病及肿瘤的发生，被誉为基因表达的“调节器”。现已证实，不同体液和组织间miRNAs表达存在差异，致使miRNAs成为法医学组织来源鉴定新的分子工具。

有研究显示，miRNAs不仅能抵抗RNA酶的降解，而且在加入强酸、强碱或温度极端改变时，其含量和分子结构亦无明显改变，加之miRNAs分子很小，因此与采用mRNA进行组织/体液鉴定相比，miRNAs检测的最大优势是灵敏度和稳定性更高。但应注意的是，miRNA的表达是相对表达，其检测依赖RT-PCR，结果难以标准化。

2.组织差异性甲基化分析法