[发明专利]葡萄SCoT-PCR特异性引物筛选及应用

说明书

本发明公开了葡萄SCoT‑PCR特异性引物筛选及应用，所筛选的引物序列如SEQ ID NO:1～12所示，并根据筛选的引物构建了SCoT‑PCR反应体系。本发明首次建立葡萄SCoT‑PCR反应体系，本发明提供的葡萄SCoT‑PCR反应体系具有操作简单、灵敏度高、重复性好等优点，能够实现对葡萄遗传多样性的分析，将有效弥补国内对葡萄遗传多样性研究的不足。本发明可用于葡萄遗传关系、分子标记方面的研究，在葡萄优异基因资源评价、挖掘和利用以及提高其果实产量和改善品质方面具有很大的科学价值和应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及葡萄SCoT-PCR特异性引物筛选及应用。

背景技术

葡萄种质资源丰富，目前生产上多使用扦插繁殖，不同地区之间品种交流频繁。同时，由于部分引种或地方品种没有确切的科学名称，致使出现同物异名和同名异物现象。品种混乱问题给葡萄生产造成很大损失，也给葡萄种质资源的有效利用带来很大困难。传统的种质鉴定方法以形态学为主，易受环境条件及主观因素的影响。此外，在育种工作中，由于骨干亲本的集中使用，葡萄品种间的遗传差异越来越小，使得依据形态特征进行品种鉴定愈加困难。因此，开展葡萄种质资源遗传多样性和构建DNA指纹数据库研究，对其种质资源鉴定、管理、品种审定及知识产权保护具有重要意义。

目标起始密码子多态性标记(SCoT)具有操作简单、多态性高、重复性好、引物通用性强等优点，且能有效产生和性状连锁的标记。目前，SCoT标记已广泛应用于枇杷、龙眼等资源的种质资源、遗传多样性分析。目前，关于葡萄SCoT-PCR反应体系的建立尚无报道。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供一种葡萄SCoT-PCR特异性引物及SCoT-PCR反应体系，以实现葡萄种质鉴定便捷高效的目的。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是，提供一种葡萄SCoT-PCR特异性引物，引物的序列如SEQ ID NO:1～12所示。

本发明还提供了SEQ ID NO:1～12所示特异性引物在葡萄种质资源鉴定中的应用。

本发明还提供了一种包含SEQ ID NO:1～11所示任一条特异性引物的SCoT-PCR反应体系，该反应体系总体积为20μL，其中，2×Taq PCR Master Mix反应液10μL；DNA模板用量为25ng；特异性引物1μL(引物浓度为10μmol/L)。

本发明还提供了一种葡萄SCoT分子标记的PCR反应程序，该反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性45s，51℃退火1min，72℃延伸90s，34个循环；72℃再延伸10min，4℃保存。

本发明的有益效果是：

(1)本发明首次建立葡萄SCoT-PCR反应体系，本发明提供的葡萄SCoT-PCR反应体系具有操作简单、灵敏度高、重复性好等优点，能够实现对葡萄遗传多样性的分析，将有效弥补国内对葡萄遗传多样性研究的不足。

(2)本发明所筛选出的特异性引物以及建立的葡萄SCoT-PCR反应体系扩增出的条带稳定性高，清晰度高，具有很高的多态性的特点。

(3)本发明可用于葡萄遗传关系、分子标记方面的研究，在葡萄优异基因资源评价、挖掘和利用以及提高其果实产量和改善品质方面具有很大的科学价值和应用价值。

附图说明

图1为SCoT-PCR反应因素水平L25(5³)正交试验PCR后的琼脂糖凝胶电泳结果图；

图2为葡萄样品在特异性引物中扩增后的琼脂糖凝胶电泳结果图；

图3为筛选后的引物在优化的葡萄SCoT-PCR反应体系中的扩增结果。

具体实施方式