[发明专利]一种用于单分子测序的螺旋分子与无机氮化硅复合纳米通道的构建方法

权利要求书

1.一种用于单分子测序的螺旋分子与无机氮化硅复合纳米通道的构建方法，其特征在于：

将氮化硅纳米孔芯片预处理除掉表面杂质及电介质击穿形成氮化硅纳米孔后，将得到的氮化硅纳米孔装配在flowcell中，flowcell一侧加入含螺旋分子的buffer 2缓冲溶液，另一侧加入空白Buffer 2缓冲液，然后在外加偏压下电泳与电渗合力驱动螺旋分子嵌插进入氮化硅纳米孔，在flowcell两侧电流突然大幅度下降时，形成复合纳米通道，增大电压并持续施加使嵌入的螺旋结构更牢固；所述螺旋分子与氮化硅纳米孔以静电方式结合。

2.如权利要求1所述一种用于单分子测序的螺旋分子与无机氮化硅复合纳米通道的构建方法，其特征在于：所述螺旋分子为带正电的或中性螺旋分子，当选用中性螺旋分子且不溶于水时，需要采用表面活性剂助溶，将螺旋分子与表面活性剂以一定比例混合后用buffer2缓冲溶液稀释并加入flowcell的一侧。

3.如权利要求2所述一种用于单分子测序的螺旋分子与无机氮化硅复合纳米通道的构建方法，其特征在于：当所述螺旋分子为带正电的螺旋分子时，将螺旋分子预先溶于水或DMSO中预组装成螺旋结构，震荡均匀后用缓冲液Buffer 2稀释得到待嵌孔的含螺旋分子的buffer 2缓冲溶液。

4.如权利要求1所述一种用于单分子测序的外消旋体芳香酰胺手性螺旋分子与无机氮化硅复合纳米通道的构建方法，其特征在于，用氮化硅薄膜悬空在硅基底中央窗口上形成氮化硅纳米孔芯片，将氮化硅纳米孔芯片先分别置于乙醇-水溶液、丙酮、异丙醇中各浸泡15～30min，烘干后用等离子体清洗仪清洗芯片，除掉表面杂质后，将芯片安装在注有缓冲液Buffer 1的flowcell中，flowcell两侧连接Ag/AgCl电极，再连接上电流源脉冲电介质击穿器，施加间歇性脉冲电流进行击穿形成氮化硅纳米孔。

5.如权利要求1所述一种用于单分子测序的螺旋分子与无机氮化硅复合纳米通道的构建方法，其特征在于，在氮化硅纳米孔孔径稳定后，通过Ag/AgCl电极将置于黑暗的法拉第笼中的flowcell的两个腔室连接到膜片钳放大器的探头上，膜片钳与数模转换器连接并连接计算机，加入外加偏压时记录电流的变化。

6.如权利要求1-5中任一项所述一种用于单分子测序的螺旋分子与无机氮化硅复合纳米通道的构建方法，其特征在于：所述螺旋分子选用带正电或中性的外消旋体芳香酰胺手性螺旋分子。