[发明专利]多肽PYRAE、其制备方法及作为BiP抑制剂在制备抗癌药物中的应用

说明书

本发明提供了一种多肽PYRAE、其制备方法及作为BiP抑制剂在制备抗癌药物中的应用。所述多肽PYRAE具有跟BiP结合并抑制它的ATPase活性的能力；水溶性好，分子量小，在2小时之内就能够进入肿瘤细胞内质网内部，能够引起内质网应急而导致细胞凋亡；无细胞毒性；抑制4T1BALB/c雌鼠的乳腺癌生长；该多肽可作为BiP抑制剂发挥抗肿瘤活性，具有较大的临床应用和开发价值。

技术领域

本发明属于医药技术领域，尤其是涉及一种多肽PYRAE、其制备方法及作为BiP抑制剂在制备抗癌药物中的应用。

背景技术

癌症已经成为世界上最可怕的疾病之一。尤其是癌症的发病率和多样性的增加，以及人类的老龄化，使得癌症的预防和治疗越来越困难。对癌症治疗的研究已经进行了几十年，但科学家们仍然没有能够针对许多类型的肿瘤开发出有效的治疗方法。

结合免疫球蛋白蛋白(BiP)，称为HSPA5或GRP78，是Hsp70家族的分子伴侣蛋白。大部分分布在于内质网(ER)中，很少部分分布在细胞核、细胞表面和细胞质中。作为UPR中的关键调节因子，BiP在ER蛋白平衡中发挥重要作用，以支持细胞存活和生长。未折叠或错误折叠的蛋白质通常发生在细胞中，如果不加以处理，可以形成有毒的蛋白质聚集物。特别是在癌细胞中，新蛋白质的合成更加疯狂，产生更多的未折叠或者错折叠蛋白质。所以癌细胞需要更强的UPR和BiP蛋白才能存活以及生长。抑制BiP可破坏UPR，破坏ER蛋白稳态，导致癌细胞死亡。BiP通过调节ER蛋白平衡和抑制细胞凋亡的能力促进癌细胞的耐药性。BiP具有ATPase活性并且BiP的功能就跟其ATPase活性有密切的关系。BiP失去其ATPase活性就不能发挥自己的分子伴侣作用。综上所述，抑制BiP能够抑制肿瘤生长，克服治疗耐药性。近年来，开发新型BiP抑制剂的研究已成为众多科学家关注的焦点。有几个属于化学分子的BiP抑制剂已经开发出来了，但抑制BiP的天然蛋白模拟肽尚未发现。

近年来，具有抗肿瘤活性的天然生物活性肽药物引起了许多科学家们的兴趣。这些药物因有高靶向性、低细胞毒性、高渗透性而成为癌症治疗的潜在发展方向。该领域大致分为两个领域:从天然资源分离或者加工出来的生物活性肽和利用现代生物化学技术合成出来的模拟肽。天然来源的生物活性肽存在着来源有限、成本高、对技术和设备要求高等的缺点。由几个到几百个氨基酸合成的天然模拟肽因其适应症广、安全性高、疗效显著而成为近年来药物开发的重要热点之一，已在癌症、艾滋病、糖尿病、肝炎等疾病的治疗中受到了广泛的欢迎。随着现代技术和设备的飞速发展，模拟肽的生产成本大大降低，模拟肽药物也进入了黄金发展阶段。

发明内容

有鉴于此，为解决上述问题，本发明提出了一种能够抑制BiP的ATPase活性，减弱BiP的处理未折叠或错折叠蛋白的功能，导致内质网应急和细胞凋亡，抑制肿瘤生长的多肽PYRAE，并提供了其制备方法和其作为BiP抑制剂在制备抗癌药物中的应用；所述多肽PYRAE水溶性好，分子量小，容易进入细胞内部，不产生细胞毒性。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

本发明一方面提供了一种多肽PYRAE，其水溶性好，分子量小(634Da)，其结构式如下：

本发明再一方面提供了一种多肽PYRAE的制备方法，包括如下步骤：

S1、在固相合成器中将Fmoc-E(Trt)-OH连接在2-氯三苯甲基氯树脂上，用二氯甲烷作为溶剂进行固相合成反应，后抽干二氯甲烷；

S2、用DMF洗涤多次，用20％哌啶脱Fmoc，颜色为蓝色则脱好，脱好后，用DMF洗涤多次，接着投放Fmoc-A(pbf)-OH、多肽缩合剂HBTU、HOBT、N-甲基吗啡啉、DMF于固相合成器中固相合成反应；