[发明专利]多肽PYRAE、其制备方法及作为BiP抑制剂在制备抗癌药物中的应用

权利要求书

1.多肽PYRAE，其结构式如下：

2.多肽PYRAE的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将Fmoc-E(Trt)-OH连接在2-氯三苯甲基氯树脂上，用二氯甲烷作为溶剂进行固相合成反应，后抽干二氯甲烷；

S2、用DMF洗涤多次，用20％哌啶脱Fmoc，脱好后，再次用DMF洗涤多次，接着投放Fmoc-A(pbf)-OH、多肽缩合剂HBTU、HOBT、N-甲基吗啡啉、DMF继续固相合成反应；

S3、后采用DMF洗涤多次，用20％哌啶脱Fmoc，脱好后，用DMF洗涤多次，后依次与Fmoc-R(pbf)-OH、Fmoc-Y(tBu)-OH、Fmoc-P(Boc)-OH进行固相缩合，直到与最后一个P反应结束，脱FMOC后，用95％的三氟乙酸切割液把制备的多肽从树脂上分离切割2-3小时，并将所得粗品用高效液相色谱仪进行分离纯化，冻干即得到多肽PYRAE。

3.权利要求1所述的多肽PYRAE或权利要求2所述的制备方法制备的多肽PYRAE，如下任一种应用：

(1)在制备BiP抑制剂药物中的应用；

(2)在制备抗癌药物中的应用；

(3)作为BiP抑制剂在制备抗癌药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述多肽PYRAE与BiP结合并抑制BiP的ATPase活性；

优选地，所述多肽PYRAE与BiP结合，其Kd＝57.7μM；

优选地，所述多肽PYRAE与BiP结合并抑制BiP的ATPase活性，其IC₅₀＝92.33μM。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述多肽PYRAE引起内质网蛋白聚集和应急，导致细胞凋亡，抑制肿瘤生长；

优选地，所述多肽PYRAE在肿瘤细胞里的使用浓度为10～200μM。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述多肽PYRAE抑制乳腺癌细胞的生长；

优选地，对乳腺癌小鼠，所述多肽PYRAE瘤旁皮下给药浓度为10mg/kg。

7.一种药物组合物，其特征在于：包括权利要求1所述的多肽PYRAE或权利要求2所述的制备方法制备的多肽PYRAE，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

8.荧光探针Mca修饰的多肽PYRAE，其结构式如下：

9.权利要求8所述的荧光探针Mca修饰的多肽PYRAE的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将Fmoc-E(Trt)-OH连接在2-氯三苯甲基氯树脂上，用二氯甲烷作为溶剂进行固相合成反应，后抽干二氯甲烷；

S2、用DMF洗涤多次，用20％哌啶脱Fmoc，脱好后，再次用DMF洗涤多次，接着投放Fmoc-A(pbf)-OH、多肽缩合剂HBTU、HOBT、N-甲基吗啡啉、DMF继续固相合成反应；

S3、后采用DMF洗涤多次，用20％哌啶脱Fmoc，脱好后，用DMF洗涤多次，后依次与Fmoc-R(pbf)-OH、Fmoc-Y(tBu)-OH、Fmoc-P(Boc)-OH进行固相缩合；与Fmoc-Pro(Boc)-OH反应完毕后，在避光条件下与酰基载体蛋白Acp、Mca进行缩合，缩合结束后，脱FMOC后，用95％的三氟乙酸切割液把制备的多肽从树脂上分离切割2-3小时，并将所得粗品用高效液相色谱仪进行分离纯化，冻干即得到荧光多肽Mca-PYRAE。

10.荧光探针Mca修饰的多肽PYRAE在肿瘤活细胞中示踪剂中的应用；

优选地，所述荧光探针Mca修饰的多肽PYRAE在肿瘤活细胞中的使用浓度为10～100μM。