[发明专利]用于人类CYP2D6基因分型的引物组合物、试剂盒及设计方法

说明书

本发明公开了一种用于人类CYP2D6基因分型的引物组合物、试剂盒及设计方法，所述引物组合物用于特异性扩增CYP2D6基因的SNP位点，所述引物组合物包括野生型引物、突变型引物和公用引物，所述公用引物用于区分与CYP2D6基因高度同源的CYP2D7和CYP2D8P基因。本发明基于AMS‑PCR对引物进行修饰，引物组合物可以规避CYP2D6、CYP2D7、CYP2D8P三个基因序列高度同源的问题，同时满足ARMS‑PCR引物设计的要求，能够准确的将CYP2D6基因的SNP位点分型，基于此得到的本检测试剂盒，具有操作强度低、检测成本低、可实现1小时出结果，为临床医生提供了更多的患者基因信息。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，特别涉及一种用于人类CYP2D6基因分型的引物组合物、试剂盒及设计方法。

背景技术

精神类疾病已经成为我国的高发疾病，据统计我国成年人中有超过17％的人深受抑郁障碍、精神分裂症等精神疾病的困扰。精神类药物治疗是目前精神类疾病的主要临床治疗手段，常见的精神类药物有三环类抗抑郁药物(TCAs)、抗精神病药、选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRIs)、精神镇静药等等。研究数据显示精神类药物的疗效和不良反应呈现出显著的个体差异，这与参与精神类药物代谢的酶、转运蛋白及药物靶受体等的基因多态性相关。

细胞色素P450超家族(CYP)是药物Ⅰ相代谢酶中重要的酶系，负责生物体内内源性物质和多种药物的代谢。CYP2D6是CYP450酶第二亚家族中的重要成员，参与了多种精神类药物的代谢，如选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRIs)、三环类抗抑郁药物(TCAs)、文拉法辛等。CYP2D6酶活性存在显著的个体差异，表现为酶活性升高、下降或完全失活，根据CYP2D6酶活力的差异可将个体分为四个代谢表型，不同代谢表型的个体在药物代谢能力上表现出明显的差异，直接影响了个体的药物疗效或药物毒副作用。CYP2D6*4等位基因中特有的c.1846GA位点的突变可导致CYP2D6基因的剪接缺陷，致使酶活性的丧失。CYP2D6*10等位基因最重要的突变位点c.100CT，可导致CYP2D6基因中间代谢型(IM)。CYP2D6*14等位基因对东方人群CYP2D6酶活性的影响更为显著，特有的位点c.1758GA的检测有助于判断个体是否携带该等位基因。CYP2D6*41等位基因中特有的位点c.2988GA已被证实与CYP2D6的异常剪接有关，这种剪接缺陷会导致一些转录RNA的外显子6的缺失，从而导致酶的活性降低。这些等位基因型会导致CYP2D6酶活性有不同程度的降低或丧失，使患者服用药物(如5-羟色胺再摄取抑制剂类等)时易发生毒副反应。

目前用于检测基因多态性的方法有很多，如直接测序法、芯片法和限制性内切酶长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)分析法等。直接测序法：是基因多态性检测最常见的方法，也是基因多态性位点检测的金标准，尽管该方法有高通量、多位点的优势，但该方法同时存在步骤繁琐，试验周期长，成本高，灵敏度低，样本易污染等问题，不利于临床大面积推广。基因芯片法：需先进行PCR扩增，之后将含有目的SNP位点的PCR产物与突变探针、野生探针杂交，通过比较两个探针杂交信号强度判断样品基因型。该方法操作过程繁琐，难以实现批量化与自动化，结果不易判读，假阳性概率高。PCR-RFLP分析法：该技术依赖基于基因突变导致的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再利用限制性内切酶进行酶切反应，电泳观察片段的大小，但其具有酶切位点局限性，并且难以进行高通量平行分析，往往出现结果误判现象，影响其检测的准确率，亦不适用于大量人群的快速筛查。

发明内容

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种用于人类CYP2D6基因分型的引物组合物、试剂盒及设计方法，以解决现有技术问题存在的不足。

本发明采用的技术方案如下：一种用于人类CYP2D6基因分型的引物组合物，所述引物组合物用于特异性扩增CYP2D6基因的SNP位点(单核苷酸多态性位点)，所述引物组合物包括野生型引物、突变型引物和公用引物，所述公用引物用于区分与CYP2D6基因高度同源的CYP2D7和CYP2D8P基因。