[发明专利]一种6-唾液酸转移酶突变体及其应用在审
| 申请号： | 202310176521.1 | 申请日： | 2023-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN116334020A | 公开（公告）日： | 2023-06-27 |
| 发明（设计）人： | 柳东;王伟祎;郑诚;应汉杰;庄伟;王志;刘金乐 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学;郑州大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/18;C12P19/26;C12P19/38;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 210009 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 唾液酸 转移酶 突变体 及其 应用 | ||
1.一种6'-唾液酸转移酶突变体，其特征在于，所述的突变体是由核苷酸序列为SEQIDNO:1的野生型6'-唾液酸转移酶突变而来，其中，所述的突变是将第449位亮氨酸突变成丙氨酸。
2.根据权利要求1所述的6'-唾液酸转移酶突变体，其特征在于，所述的6'-唾液酸转移酶突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。
3.编码要求权利求2所述的6'-唾液酸转移酶突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。
4.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求3所述的6'-唾液酸转移酶突变体的核苷酸序列。
5.一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求4所述的重组载体或权利要求3所述的6'-唾液酸转移酶突变体的核苷酸序列。
6.权利要求1-3所述的6'-唾液酸转移酶突变体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)构建包含所述6'-唾液酸转移酶的编码基因的重组质粒，所述重组质粒以大肠杆菌为宿主；
(2)以步骤(1)构建的重组质粒为模板，利用带有突变位点的寡聚核苷酸序列为引物对，通过环状PCR扩增得到包含有SEQ ID NO:5所示的碱基序列的PCR产物，之后将PCR产物采用DpnI酶消化模板，得到环状重组质粒；
(3)将步骤(2)得到的环状重组质粒转化至宿主细胞BL21(DE3)感受态细胞中，获得含有6'-唾液酸转移酶突变体的基因工程菌。
7.权利要求1-3所述的6'-唾液酸转移酶突变体在生产制备唾液酸乳糖中的应用。
8.权利要求1-3所述的6'-唾液酸转移酶突变体在CTP异位再生体系中的应用。
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