[发明专利]一种田蓟苷的HSCCC制备方法

说明书

本发明提供了一种田蓟苷的HSCCC制备方法，涉及中药提取物制备技术领域。该制备方法包括步骤：香青兰原料经用醇类溶剂提取或大孔树脂纯化，得到香青兰总黄酮提取物，经流动相溶解得到样品溶液；配置高速逆流色谱溶剂：所述色谱溶剂分为A、B两组分，A组分选自甲醇、乙醇、水中的至少一种，B组分选自正己烷、环己烷、乙酸乙酯中的至少一种，A组分和B组分的体积比为9‑1：1‑9；使用高速逆流色谱进行洗脱分析，定性检测后收集流份，重结晶得到田蓟苷。该制备方法可提高田蓟苷的得率和纯度，降低分离难度，提高重现性。

技术领域

本发明属于中药提取物制备技术领域，具体涉及一种田蓟苷的HSCCC制备方法。

背景技术

田蓟苷(Tilianin)是从植物药香青兰(Dracocephalummoldovica L)干燥的地上部分，提取所得的一个黄酮类单体化合物。有研究发现，田蓟苷具备抗氧化应激、抑制心肌细胞凋亡、保护心肌、抗动脉粥样硬化等生物活性，可用于制备治疗心血管疾病的药物。虽然，田蓟苷作为一种黄酮类化合物在香青兰中的含量很高，但是，关于其分离纯化的研究确仍然较少。目前，主要的分离纯化方法为采用传统柱色谱法，如使用大孔树脂吸附色谱柱从香青兰中得到总黄酮，再将总黄酮进行硅胶柱层析得到田蓟苷。

中国发明专利CN101781345B公开了一种田蓟苷的制备方法，即先将香青兰使用有机溶剂萃取后，进行硅胶柱层析，流动相采用A和B组分混合的复合洗脱剂，所述A组分选自甲醇、乙醇、丙酮、异丙酮、丁醇中的至少一种，所述B组分选自氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、二氯乙烷中的至少一种；A组分与B组分的体积比为90：10-10：90，进行梯度洗脱得到洗脱液；合并相同组分洗脱液，浓缩后得到田蓟苷。但是，该传统色谱柱的分离纯化方法成本高、耗时长、重现性差，且因田蓟苷溶解度差，进一步提高了分离难度，导致产量偏低，该发明的田蓟苷得率最高为78.2％，不能实现量产，难以满足田蓟苷高效、高产量、规模化制备的需求。

高速逆流色谱(High-Speed Counter-Current Chromatography，HSCCC)是一种连续高效的液-液分配色谱技术，其工作原理是通过高速旋转，在螺旋管内对两相溶剂体系建立一种特殊的单向性流体力学平衡，利用样品在两相溶剂体系中的分配系数不同而达到分离的目的。高速逆流色谱技术最大的优点在于固定相和流动相都是液体，在洗脱过程中可以避免样品的失活、不可逆吸附等样品损失，具有回收率高、制备量大、经济成本低、重现性好等独特优势。目前已广泛应用于生物医药研发、天然产物分离、化工、生命科学和食品等领域。

Wang Chaoyue等人(Large-scale separation of baicalin and wogonosidefrom ScutellariaBaicalensisGeorgi by the combination of pH-zone-refining andconventional counter-current chromatography)将高速逆流色谱应用于黄岑中草药中黄岑甘的分离纯化，使用正丁醇-乙酸乙酯-水组成的两相溶剂体系，乙酸乙酯-乙酸-盐酸用于CCC，从500mg黄芩粗提物中HSCCC一次成功分离出黄芩苷186.7mg，其纯度95.3％；进一步二次分离得到黄芩苷64.3mg，纯度98.2％。

在现有的田蓟苷制备方法中，尚未见使用高速逆流色谱进行田蓟苷的分离制备。为了解决上述问题，实现田蓟苷高产量、规模化的工业生产，本发明提供一种田蓟苷的HSCCC制备技术，将其应用于田蓟苷的分离制备中，提高田蓟苷产率及重现性，降低成本。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种田蓟苷的HSCCC制备方法，可有效解决制备田蓟苷产率低、重现性低、分离难度高、耗时长、成本高的问题，实现田蓟苷高得率的生产，且保留高纯度和活性。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供一种田蓟苷的HSCCC制备方法，包括以下步骤：