[发明专利]一种检测猴痘病毒B.1 lineage的引物探针组、试剂盒及应用

说明书

本发明提供了一种检测猴痘病毒B.1lineage的引物探针组、试剂盒及应用，涉及生物医药技术领域。本发明提供了一种检测猴痘病毒B.1lineage的引物探针组，不仅能够同时利用多重荧光定量PCR和数字PCR方法实现猴痘病毒B.1lineage的检测，而且具有较高的特异性和灵敏度。经试验证实可知，利用本发明所述引物探针组能快速特异性检出猴痘病毒cladeII并将猴痘病毒B.1lineage从其他lineages中区分开来，为开发猴痘病毒分支特异性检测试剂盒奠定了基础，具有重要的开发价值和推广意义。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种检测猴痘病毒B.1 lineage的引物探针组、试剂盒及应用。

背景技术

猴痘(monkeypox)，一种传染性的人畜共患病，属于正痘病毒科，脊椎动物痘病毒亚科，正痘病毒属。猴痘首次在1958年从圈养的猴子体内被发现，1970年在刚果民主共和国的儿童体内检测到。自1970年人类消灭天花以来，猴痘病毒逐渐成为感染人类最严重的正痘病毒。经历10-14天的潜伏期，病人逐渐出现发热，乏力，头痛，肌肉痛和大面积皮疹等症状。几乎90％感染猴痘的病例都出现淋巴结肿大。该特征可区别于天花。猴痘可通过与病人的直接接触或者与病人污染的床上用品、衣物或表面覆盖物接触而传播，也可通过性接触传播。

自2022年5月13日起，西欧和北美多国报道了越来越多的猴痘病例。这是首次在中西非以外的国家出现大规模的猴痘病例和持续的人传人传播链。与过去的暴发相比，当前的病例大多出现在同性恋人群中，孕妇和婴儿也未能幸免。及早检测到该病毒对于控制猴痘的传播至关重要。

与2021年的人猴痘病毒尼日利亚毒株相比，2022年人猴痘病毒形成了一个独立的分支B.1。与2021年之前的人猴痘病毒相比，B.1 lineage有46个单核苷酸突变，其中24个突变引起了氨基酸的改变。加速的微进化事件可能增加病毒在人际间的传播。

一些血清学的检测方法，例如中和实验和血凝抑制实验被用来检测猴痘病毒刺激机体产生的抗体，但是猴痘病毒表面抗原之间的交叉反应使得血清学检测方法容易产生假阳性。目前尚无特异性检测猴痘病毒B.1 lineage的有效方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测猴痘病毒B.1lineage的引物探针组，能在同一体系里快速检测并区分猴痘病毒B.1lineage，具有良好的特异性和灵敏度。

为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种检测猴痘病毒B.1lineage的引物探针组，所述引物探针组包括以下正反向引物序列和两条探针序列：

正向引物序列：5'-AGTACACAGACCTCCACCAC-3'；

反向引物序列：5'-AGTAATTGACCTACTGGTCTAGGG-3'；

第一探针序列：5'HEX-AAACCAGTCCAAAATTCGCCACAA-BHQ13'；

第二探针序列：5'FAM-AGTCCAAAATCCGCCA-MGB 3'。

优选的，所述第一探针和第二探针有一个核苷酸位点的差异。

本发明提供了一种检测猴痘病毒B.1lineage的多重荧光定量PCR试剂盒，所述试剂盒包括上述的正反向引物序列和两条探针序列。

优选的，所述正反向引物序列和两条探针序列在同一反应体系中进行反应。