[发明专利]一种用于检测烟草青枯病菌的生物传感器及其制备方法在审
| 申请号： | 202310056998.6 | 申请日： | 2023-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN116356051A | 公开（公告）日： | 2023-06-30 |
| 发明（设计）人： | 王杰;鲁莉华;王瑛;王新伟;薛文鑫;王宏涛;任广伟 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院烟草研究所（中国烟草总公司青州烟草研究所） |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12N15/11;C12Q1/682;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京子焱知识产权代理事务所(普通合伙) 11932 | 代理人： | 李松 |
| 地址： | 266101 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 烟草 病菌 生物 传感器 及其 制备 方法 | ||
1.一种用于检测烟草青枯病菌的生物传感器，其特征在于，包括信号识别元件，信号转换器，信号输出元件三部分，其中由亚甲基蓝MB分子修饰过的与烟草青枯病菌基因组DNA序列互补的MB-cDNA片段作为信号识别元件，外切酶Exo III作为信号产生及信号循环放大器，锡-铟氧化物ITO电极作为信号输出元件。
2.根据权利要求1所述的一种基于均相电化学的生物传感器，其特征在于，生物传感器检测时在电压-0.21V的位置出现差分脉冲伏安电化学信号峰。
3.一种用于检测烟草青枯病菌的生物传感器制备方法，包括以下步骤：
(1)将1170ng/mL的烟草青枯病菌基因组DNA用pH值为5.5-9.5的Tris-HCl缓冲液溶解，加到离心管中，震荡2min，使烟草青枯病菌基因组DNA充分伸展；
(2)再将0.25μM的5'端修饰有亚甲基蓝MB分子的烟草青枯病菌基因组DNA保守序列片段互补的MB-cDNA用pH为5.5-9.5的Tris-HCl缓冲液充分溶解后加入到步骤(1)的烟草青枯病菌基因组DNA缓冲液中；
(3)将步骤(2)的混合液搅拌均匀后，放到95℃的金属浴中加热5min，然后冷却至室温并在室温放置2h，使两者充分互补配对；
(4)最后加入浓度为0.03-0.09U/μL外切酶Exo III，然后用pH为5.5-9.5的Tris-HCl缓冲液填充体系至400μL，将整个体系放置在37℃反应60-150min，使外切酶Exo III充分剪切，形成用于检测烟草青枯病菌的生物传感器，最后在电化学工作站进行测试。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的一种用于检测烟草青枯病菌的生物传感器制备方法中所用的Tris-HCl缓冲液最佳pH为7.5。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的一种用于检测烟草青枯病菌的生物传感器制备方法步骤(2)中根据已报导的烟草青枯病菌Rip TALI-9基因设计并合成5'端修饰有亚甲基蓝MB分子的DNA探针MB-cDNA，其序列为3'-ACT GGT CCC GGG TGT AGC ACCTGT AGC GAG CCG-MB-5'。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的一种用于检测烟草青枯病菌的生物传感器制备方法中所用的外切酶Exo III的最优浓度为0.075U/μL。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的一种用于检测烟草青枯病菌的生物传感器制备方法中所用的外切酶Exo III的最优孵育时间为90min。
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