[发明专利]一种柠檬酸壳聚糖水凝胶的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种柠檬酸壳聚糖水凝胶在心肌组织工程中细胞移植支架材料中的应用。

2.根据权利要求1所述的柠檬酸壳聚糖水凝胶的制备方法，包括以下步骤：

(1)将无水柠檬酸、乙酸酐、冰乙酸置于茄型瓶中，在一定温度下搅拌直至柠檬酸全部溶解后继续保温搅拌一定时间，减压蒸馏除去乙酸，向剩余的介质中加入一定量的热三氯甲烷，继续搅拌直至有白色沉淀析出，抽滤，用三氯甲烷反复洗涤，产物真空干燥24h，得到柠檬酸酐，密封保存；

(2)将壳聚糖溶解于一定浓度的醋酸溶液中，搅拌过夜，用甲醇稀释，取步骤(1)中制备的柠檬酸酐溶解于甲醇中，将壳聚糖溶液和柠檬酸酐溶液混合并置于茄型瓶中，在一定温度下搅拌反应数小时，反应结束后冷却至室温，向混合溶液中加入丙酮，搅拌，抽滤，分别用丙酮、乙醚各洗涤三次，将得到的产物用透析袋透析48h，产物冷冻干燥48h，得到柠檬酸壳聚糖；

(3)将β-GP溶液于冰水浴和磁力搅拌下加入步骤(2)制备得到的柠檬酸壳聚糖溶液中，继续搅拌15～30min，在低温搅拌的条件下加入羟乙基纤维素溶液，获得柠檬酸壳聚糖水凝胶。

3.根据权利要求2所述的柠檬酸壳聚糖水凝胶制备方法，其特征在于，步骤(1)中无水柠檬酸、乙酸酐、冰乙酸的比例为1:(0.8～1.2):(0.5～0.8)。

4.根据权利要求2所述的柠檬酸壳聚糖水凝胶制备方法，其特征在于，步骤(1)中搅拌温度为35～40℃，搅拌时间为18～24h。

5.根据权利要求2所述的柠檬酸壳聚糖水凝胶制备方法，其特征在于，步骤(1)中热三氯甲烷的温度为40～50℃，用三氯甲烷洗涤次数为3～5次。

6.根据权利要求2所述的柠檬酸壳聚糖水凝胶制备方法，其特征在于，步骤(2)为：将3～5％壳聚糖溶解于8～12％醋酸溶液中，搅拌过夜，用甲醇稀释4～8倍，取步骤(1)中制备的柠檬酸酐溶解于甲醇中，将壳聚糖溶液和柠檬酸酐溶液混合并置于茄型瓶中，在70～100℃下搅拌反应10～15h，反应结束后冷却至室温，向混合溶液中加入丙酮，搅拌，抽滤，分别用丙酮、乙醚各洗涤三次，将得到的产物用透析袋透析48h，产物冷冻干燥48h。

7.根据权利要求6所述的柠檬酸壳聚糖水凝胶制备方法，其特征在于，壳聚糖与柠檬酸酐的质量比为1:(0.6～1.0)。

8.根据权利要求2所述的柠檬酸壳聚糖水凝胶制备方法，其特征在于，步骤(3)中柠檬酸壳聚糖溶液、β甘油磷酸钠溶液和羟乙基纤维素溶液的质量比为(18～22):(3～5):(2～4)。

9.根据权利要求8所述的柠檬酸壳聚糖水凝胶制备方法，其特征在于，柠檬酸壳聚糖溶液、β甘油磷酸钠溶液和羟乙基纤维素溶液的质量比为20:4:3。