[发明专利]一种用于二长棘鲷多重PCR的SSR荧光标记引物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于二长棘鲷SSR多重PCR引物，包括10对特异性引物，分别为引物对Pae308、Pae654、Pae1218、Pae2027、Pae2333、Pae1291、Pae2105、Pae1271、Pae217和Pae347，其中每对引物由一个正向引物F和一个反向引物R组成；该引物多态性高，产物稳定，结果准确可靠；还公开了一种包括上述引物的试剂盒以及利用上述引物进行二长棘鲷鳍遗传多样性评估的方法，以及上述SSR多重PCR引物、试剂盒和方法在评估二长棘鲷遗传多样性和渔业资源开发保护中的应用。

技术领域

本发明属于微卫星标记技术领域，具体涉及一种用于二长棘鲷多重PCR的SSR荧光标记引物及其应用。

背景技术

二长棘鲷(Paerargyrops edita)属鲈形目、鲷科、二长棘鲷属，为暖温性近底层鱼类，分布于太平洋西部，在中国主要产于东海南部和南海北部。二长棘鲷体侧扁，呈椭圆形，具有重要的经济价值，是南海北部底拖网渔业的重要捕捞对象。但近30年的渔获数据研究表明，二长棘鲷出现体长偏小，性早熟和群体结构趋向简单化等退化趋势。

微卫星(Microsatellite DNA)又称为SSR，一般由1～6个碱基组成重复片段，因其在真核生物基因组中分布广、种类多以及重复次数在个体间具有高度变异性等特点，呈现出等位基因分型难度低、高度的多态性和高度的共显性等突出优点。目前对海洋鱼类进行遗传多样性分析，SSR是最适合的分子标记。

多重PCR(Multiplex PCR)是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,可大幅度降低人为操作误差,具有节省实验材料，使实验更加高效、经济、便捷的特点。目前多重PCR被广泛应用于动植物研究中,尤其是为群体遗传多样性分析、遗传分离模式分析和种质鉴定等研究提供了有力的技术手段。

微卫星标记和多重PCR通用荧光标记引物的结合使用，具有操作简便高效、成本低廉，人为误差小，结果准确等优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于二长棘鲷多重PCR的SSR荧光标记引物，该引物多态性高，产物稳定，结果准确可靠。

本发明的目的还在于提供一种二长棘鲷鳍遗传多样性的评估方法，该方法鉴定准确，实验成本较低。

本发明的最后一个目的在于提供上述引物在评估二长棘鲷遗传多样性和渔业资源开发保护方面的应用。

本发明的上述第一个目的是通过以下技术方案来实现的：一种用于二长棘鲷多重PCR的SSR荧光标记引物，包括10对特异性引物，分别为引物对Pae308、Pae654、Pae1218、Pae2027、Pae2333、Pae1291、Pae2105、Pae1271、Pae217和Pae347，其中每对引物由一个正向引物F和一个反向引物R组成；

其中：

所述引物对Pae308的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：1～2所示；

所述引物对Pae654的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：3～4所示；

所述引物对Pae1218的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：5～6所示；

所述引物对Pae2027的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：7～8所示；

所述引物对Pae2333的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：9～10所示；

所述引物对Pae1291的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：11～12所示；

所述引物对Pae2105的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：13～14所示；