[发明专利]一种用于二长棘鲷多重PCR的SSR荧光标记引物及其应用

权利要求书

1.一种用于二长棘鲷多重PCR的SSR荧光标记引物，其特征是：包括10对特异性引物，分别为引物对Pae308、Pae654、Pae1218、Pae2027、Pae2333、Pae1291、Pae2105、Pae1271、Pae217和Pae347，其中每对引物由一个正向引物F和一个反向引物R组成；

其中：

所述引物对Pae308的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：1～2所示；

所述引物对Pae654的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：3～4所示；

所述引物对Pae1218的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：5～6所示；

所述引物对Pae2027的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：7～8所示；

所述引物对Pae2333的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：9～10所示；

所述引物对Pae1291的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：11～12所示；

所述引物对Pae2105的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：13～14所示；

所述引物对Pae1271的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：15～16所示；

所述引物对Pae217的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：17～18所示；

所述引物对Pae347的正、反向引物的碱基序列分别如SEQ ID NO：19～20所示。

2.根据权利要求1所述的用于二长棘鲷多重PCR的SSR荧光标记引物，其特征是：还包括2条荧光标记的通用引物M13和PQE-F，与通用引物M13相配合的荧光标记为5-FAM，与通用引物PQE-F相配合的荧光标记为5-HEX，其中所述通用引物M13的碱基序列如SEQ IDNO：21所示，所述通用引物PQE-F的碱基序列如SEQ ID NO：22所示。

3.一种用于二长棘鲷多重PCR的试剂盒，其特征是包括权利要求1或权利要求2中的引物。

4.一种二长棘鲷鳍遗传多样性的评估方法，其特征是包括以下步骤：

(1)提取二长棘鲷DNA：采集二长棘鲷样品的鳍条组织，提取基因组DNA；

(2)合成特异性引物：筛选并合成上述的10对特异性引物，所述10对特异性引物分为G1组和G2组，其中G1组包括引物对Pae308、Pae654、Pae1218、Pae2027、Pae2333和荧光标记的通用引物，G2组包括引物对Pae1291、Pae2105、Pae1271、Pae217、Pae347和荧光标记的通用引物；

(3)多重PCR扩增：利用步骤(2)中的两组特异性引物和荧光标记通用引物对步骤(1)中的基因组DNA进行PCR扩增，得到扩增产物；

(4)遗传多样性评估：对扩增产物进行基因分型，统计每个位点和个体的等位基因，根据杂合度指标比较遗传多样性。

5.根据权利要求4所述二长棘鲷鳍遗传多样性的评估方法，其特征是步骤(3)中PCR扩增时，G1组多重PCR扩增反应体系为：

。

6.根据权利要求4所述二长棘鲷鳍遗传多样性的评估方法，其特征是步骤(3)中PCR扩增时，G2组多重PCR扩增反应体系为：

7.权利要求1-2所述的SSR荧光标记引物、权利要求3所述试剂盒或权利要求4-7任一项方法在评估二长棘鲷遗传多样性中的应用。

8.权利要求1-2所述的SSR荧光标记引物、权利要求3所述试剂盒或权利要求4-7任一项方法在渔业资源开发保护中的应用。