[发明专利]一种含干细胞外泌体的雾化剂及其用于治疗肺部疾病的应用

说明书

本发明公开了一种含干细胞外泌体的雾化剂，包括下述组分：脐带间充质干细胞外泌体1‑10μg/mL、脐带多肽10‑30μg/mL、黄芪多糖30‑50μg/mL、余量为缓冲液。本发明还公开了上述含干细胞外泌体的雾化剂的制备方法以及其用于治疗肺部疾病的应用。本发明的雾化剂以脐带间充质干细胞外泌体、脐带多肽以及黄芪多糖为主要有效组分，其抗炎、修复肺部损伤的效果更为优异，在肺部疾病治疗领域具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及干细胞制剂技术领域，尤其涉及一种含干细胞外泌体的雾化剂及其用于治疗肺部疾病的应用。

背景技术

肺是人体重要的呼吸器官。肺损伤多由肺部外伤、感染等因素引起，其不仅会导致人们生活质量的下降，甚至严重威胁到人体的健康和寿命。干细胞能够促进肺部损伤组织的修复，减少促炎细胞因子，降低过度炎症反应，对于抗肺纤维化和肺部炎症具有良好的防治效果。但是，直接向体内输入干细胞的作用是有限的。干细胞外泌体是干细胞分泌微小的囊泡，主要功效成分包括mRNA、microRNA和蛋白质等，与干细胞的生物学性能相似而更加安全稳定高效，膜结构与细胞膜相同，可以通过胞吞进入细胞，在体内发挥更持久的作用。多项研究表明，干细胞外泌体通过雾化的形式吸入，可以起到靶向修复肺部损伤的效果，其对肺部疾病的干预效果优于直接使用干细胞。因此，对于肺部疾病的治疗来说，干细胞外泌体雾化制剂的开发是一个很有前景的研究方向。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种含干细胞外泌体的雾化剂及其用于治疗肺部疾病的应用。

本发明提出的一种含干细胞外泌体的雾化剂，包括下述组分：脐带间充质干细胞外泌体1-10μg/mL、脐带多肽10-30μg/mL、黄芪多糖30-50μg/mL、余量为缓冲液。

优选地，所述缓冲液为PBS缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液中的至少一种。

优选地，所述缓冲液的pH为5-7。

一种所述的含干细胞外泌体的雾化剂的制备方法，包括下述步骤：

S1、取新鲜脐带经过消毒、清洗后，剔除血管，剪成块状，将得到的组织块依次用胰蛋白酶、胶原酶消化，然后用PBS洗涤，置于培养皿中，加入含10％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5％CO₂培养箱中进行培养，待细胞融合度达到80-90％后，按1:(2-4)的比例进行传代，记为P1代，并收集P1代传代后剩下的组织块；

S2、采用含10％胎牛血清的DMEM培养基对所述P1代细胞传代培养至P3-P5代，待P3-P5代细胞融合度达到80-90％后，去除培养基，用PBS洗涤细胞后，加入DMEM/F12无血清培养基培养20-30h，离心，收集上清液，然后将所述上清液超速离心，收集沉淀，得到脐带间充质干细胞外泌体；

S3、将所述传代后剩下的组织块用PBS洗涤后置于培养瓶中，加入复合酶液进行酶解反应，酶解反应结束后，先高温灭酶，然后冷却、离心，将得到的上清液采用截留分子量为1万的超滤膜进行超滤，收集透过液进行浓缩、冷冻干燥，得到脐带多肽；

S4、分别将脐带间充质干细胞外泌体、脐带多肽和黄芪多糖加入适量缓冲液充分溶解，得到脐带间充质干细胞外泌体溶液、脐带多肽溶液和黄芪多糖溶液，然后将脐带间充质干细胞外泌体溶液、脐带多肽溶液和黄芪多糖溶液按比例混合均匀，加入缓冲液定容至一定浓度，即得。

优选地，S1中，将得到的组织块依次用胰蛋白酶、胶原酶消化的具体步骤为：将组织块置于培养皿中，加入浓度为0.125％的胰蛋白酶，在37℃水浴下消化20-30min，然后离心，弃去上清液，将得到的组织块用PBS洗涤后置于培养皿中，加入浓度为0.2％的胶原酶，在37℃水浴下消化1.5-2h，然后离心，弃去上清液，即可。

优选地，S2中，超速离心的转速为100000-150000r/min，时间为30-90min。