[发明专利]UGT1A1基因多位点扩增引物组、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一种UGT1A1基因多位点扩增引物组、试剂盒及检测方法。本发明提供的一种UGT1A1基因多位点扩增引物组，包括如下引物组的混合物：如SEQ ID NO.1‑12所示；上述的引物组的混合物可以在同一PCR反应体系中进行多重PCR扩增，UGT1A1基因的不同位点均能得到充分的扩增，利用该充分扩增的产物，能够准确的、高灵敏度的进行UGT1A1基因的不同位点的突变检测，且采用多重PCR扩增，通量高，快速简单成本低。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一种UGT1A1基因多位点扩增引物组、试剂盒及检测方法。

背景技术

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(uridinediphosphate-glucuronyl transferase，UGT)1A1是一种位于肝细胞中催化脂溶性非结合胆红素，使之与葡萄糖醛酸结合生成胆红素的一种催化酶。UGT1A1酶的功能完全或部分丧失会导致未结合胆红素在人体内积累从而导致黄疸。目前研究发现，UGT1A1基因突变的存在可不同程度降低UGT1A1酶活性，临床上，根据UGT1A1酶活性水平的不同，可将高间接胆红素血症分为三种：Crigler-Najjar综合征Ⅰ型(CN-I)，Crigler-Najjar综合征Ⅱ型(CN-II)，Gilbert综合征(Gilbert syndrome，GS)。CNS-Ⅰ患者UGT1A1酶活性严重缺乏甚至消失，黄疸严重，总胆红素(TBIL)342μmol/L，易进展为核黄疸，病死率极高；CNS-Ⅱ患者UGT1A1酶活性约占正常值的10％，TBIL多波动于103～342μmol/L，给予苯巴比妥60～120mg.d^-1治疗后胆红素水平较前降低超过25％。目前，遗传性高间接胆红素血症以GS多见，发病率高达5％～10％。在GS患者体内，UGT活性仅为正常人的30％，直接导致了患者的高间接胆红素血症，此外，研究发现UGT1A1基因多态性会增加胆结石、心血管疾病、癌症等的发病风险。

既往的CNS依靠肝功能检测、低热卡试验、苯巴比妥实验、利福平试验、肝组织活检等来协助诊断，单这些检测特异性不高，而对UGT1A1基因突变的检测可明确辅助诊断高间接胆红素血症，对该病及早的诊断和基因检查可以避免过度治疗，减轻患者的心理负担和经济负担。

p.G71R、p.P229Q、p.Y486D、p.P364L、A(TA)7TAA和UGT1A1*60是UGT1A1基因的几个致病突变位点，这些位点突变可引起高间接胆红素血症。现今国内外已报道的UGT1A1基因突变的检测方法主要有高分辨熔解曲线(HRM)技术、直接测序法，聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术(PCR-SSCP)，聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)，高效液相色谱(DHPLC)技术，基因芯片技术、实时荧光定量PCR技术等，但缺点是这些基因诊断方式花费高、繁琐，在临床上开展困难。此外，这些技术有的操作程序复杂，设备耗材昂贵，成本较高，有的灵敏度低，不能定性，有的易于造成交叉污染，出现假阳性结果。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于提供一种UGT1A1基因多位点扩增引物组、试剂盒及检测方法，能够简单快速、准确的检测出UGT1A1基因多位点突变，且灵敏度较高，成本较低。

为此，本发明提供了如下的技术方案：

一种UGT1A1基因多位点扩增引物组，包括如下所有引物组的混合物：

p.G71R引物组，包括：正向引物p.G71R-F，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示；反向引物p.G71R-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

p.P229Q引物组，包括：正向引物p.P229Q-F，其核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示；反向引物p.P229Q-R，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；