[发明专利]一种用于检测人乳头瘤病毒的引物探针组合及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测人乳头瘤病毒的引物探针组合及其应用。所述引物探针组合包括检测人乳头瘤病毒引物和探针，所述引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列，所述探针选自核酸序列包括SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.25所示的探针中的任意一种或至少两种的组合。本发明巧妙设计能够特异性扩增人乳头瘤病毒的引物和分子信标探针，实现高灵敏度、特异性扩增，同时巧妙设计探针的Tm值，能够在熔解曲线分析中进行明显区分，从而实现快速、准确且高灵敏地对HPV合计23个型别进行分型检测，并精准判断每种型别。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种用于检测人乳头瘤病毒的引物探针组合及其应用。

背景技术

人乳头瘤病毒(Human papillomvirus，HPV)是一种嗜上皮性病毒，有高度的特异性。目前已经确定HPV型别已经超过了120种，约30余种定向感染人体生殖道皮肤及粘膜的复层鳞状上皮，从而导致尖锐湿疣以及宫颈病变，甚至可能引起宫颈癌的发生。不同亚型的HPV感染导致不同病变，根据病变的程度高低，将HPV亚型分为高危型和低危型。低危型与性传播疣或尖锐湿疣有关，一般不诱发癌变；高危型与子宫颈癌及子宫上皮内瘤变的发生有关，高危型HPV的持续性感染是宫颈癌发生的必要条件。HPV感染使得宫颈癌的相对危险性增加，而从高危型HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变最终发展宫颈癌大约需要5-10年。因此，有针对性地对高危型HPV进行全面检测，对宫颈癌的早期诊断和治疗具有重要的意义。

目前常见的HPV检测方法包括测序法、杂交捕获法及荧光PCR法等。测序法的结果相对准确，但操作繁琐，且对操作者的要求较高，灵敏度低，不适于临床应用；荧光PCR法由于仪器受通道的限制，每个反应管只能检测4-5个荧光通道且每个通道只能检测一个病原，使得每管检测的病原不超过4个；PCR杂交法不仅需要具有专业的扩增设备、杂交仪器和显色设备外，还需要经历开盖点样操作，容易导致产物污染从而造成假阳性，影响样本检测结果的准确性。

综上所述，开发高效、操作简单、低成本的HPV检测方法，能够进行高灵敏度检测以及精准分型，对于HPV检测领域具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种用于检测人乳头瘤病毒的引物探针组合及其应用，本发明巧妙设计能够特异性扩增人乳头瘤病毒的引物和分子信标探针，具备高灵敏度和特异性，同时结合荧光PCR及熔解曲线分析，能够快速、准确且高灵敏地对HPV合计23个型别进行分型检测并精准分型。

为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种用于检测人乳头瘤病毒的引物探针组合，所述引物探针组合包括检测人乳头瘤病毒引物和探针，所述引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1和SEQID NO.2所示的序列，所述探针选自核酸序列包括SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.25所示的探针中的任意一种或至少两种的组合。

本发明中，巧妙设计能够特异性扩增人乳头瘤病毒的引物和分子信标探针，分子信标探针在空间结构上能使荧光基团和淬灭基团达到无限接近的程度，结合高特异性引物，实现高灵敏度、特异性扩增，同时巧妙设计探针的Tm值，能够在熔解曲线分析中进行明显区分，从而实现快速、准确且高灵敏地对HPV合计23个型别进行分型检测，并精准判断每种型别。

本发明中，所述引物探针组合包括检测人乳头瘤病毒HPV-6、HPV-11-1、HPV-56、HPV-58、HPV-68、HPV-82、HPV-26、HPV-39、HPV-51、HPV-52-1、HPV-73、HPV-59、HPV-31、HPV-35、HPV-45-1、HPV-53、HPV-83、HPV-16-1、HPV-18-1、HPV-33、HPV-42、HPV-66和HPV-81的引物和探针。

所述HPV-6的探针的核酸序列包括SEQ ID NO.3所示的序列。