[发明专利]一种PRV含量的检测方法

权利要求书

1.一种PRV含量的检测方法，其特征在于，所述PRV含量的检测方法采用免疫印迹法，所述PRV含量的检测方法包括以下步骤：

S1、对PRV标准品、PRV待测品分别用稀释液进行稀释，对应得稀释后的PRV标准品和稀释后的PRV待测品；

S2、将稀释后的PRV标准品、稀释后的PRV待测品分别进行预处理，再进行SDS-PAGE电泳分离后，转移到PVDF膜上；

S3、封闭PVDF膜，用PRV的特异性单克隆抗体进行孵育和洗膜后，再用HRP标记抗体进行孵育和洗膜，获得二抗洗膜后的PVDF膜；

S4、将所述二抗洗膜后的PVDF膜进行显色反应，得到PRV标准品的灰度值和PRV待测品的灰度值，根据PRV标准品病毒含量与对应的灰度值建立标准曲线，再根据所述标准曲线和PRV待测品的灰度值计算出所述PRV待测品中的PRV含量。

2.如权利要求1所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，步骤S1中：

所述稀释液为0.01mol/L PBS。

3.如权利要求1所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，步骤S1中：

所述PRV标准品在16～128倍稀释时，WB定量能形成良好线性范围，稀释后的所述PRV标准品的病毒含量在7.81×10^5.0～6.25×10^6.0TCID₅₀/ml。

4.如权利要求1所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，在步骤S2包括：将稀释后的PRV标准品、稀释后的PRV待测品分别添加loading buffer，经过离心、沸水浴、电泳分离后，再转移到PVDF膜上。

5.如权利要求1所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，步骤S3中，所述封闭使用的封闭液包括含脱脂奶粉的TBS。

6.如权利要求1所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，步骤S3中，所述PRV的单克隆抗体通过以下方法制备：

将PRV病毒培养、灭活和乳化后制得免疫抗原，再将所述免疫抗原对BALB/C鼠进行免疫，得PRV的单克隆抗体。

7.如权利要求1所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，步骤S4中，根据所述标准曲线和PRV待测品的灰度值计算出所述PRV待测品中PRV含量的步骤包括：

S41、根据所述PRV标准品的病毒含量与对应的所述灰度值，获得标准曲线；

S42、根据所述标准曲线公式和所述PRV待测品的灰度值，获得PRV待测品的相对含量；

S43、将PRV待测品相对含量乘以待测品的稀释倍数，得到PRV待测品的病毒含量系数，则PRV待测品中的PRV含量＝病毒含量系数

×10^8.0TCID₅₀/ml。

8.如权利要求7所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，在步骤S42中，所述灰度值是用ImageJ软件分析WB图上条带得到的。

9.如权利要求1所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，所述标准曲线的R²≥0.99；所述标准曲线上，至少有三个或三个以上连续的点。

10.如权利要求1所述的PRV含量的检测方法，其特征在于，根据所述标准曲线和PRV待测品的灰度值计算出所述PRV待测品中的病毒含量的步骤中，所述PRV待测品的相对含量需在建立标准曲线方程的连续点的阀值范围内，且至少两个所述PRV待测品病毒相对含量的重复检测值之间的差异系数小于10％。