[发明专利]用于肺癌早筛的特异性甲基化引物及筛查方法

权利要求书

1.用于肺癌早筛的特异性甲基化引物，其特征在于：包括与肺癌人群早期甲基化位点相关的2对靶标特异引物、2个特异性引物探针；其中所述2对靶标特异引物的序列如下：

Seq ID NO.1：F-TAACCCGACTTAAACGACGA，

Seq ID NO.2：R-GTTTTTTGGATAGTTAGGTAAT；

Seq ID NO.3：F-TGGGTATTGTAGTCGCGAGTTATC,

Seq ID NO.4：R-CTACGTAAACAAACGATTAACG；

所述特异性引物探针序列如下：

Seq ID NO.5：FAM-CTCGTACGACCCCGATCG-BHQ1；

Seq ID NO.6：

TEXAS RED-CAATCTATACGTCCAACGTACTCTTTTACGCGCTA-BHQ2。

2.根据权利要求1所述的用于肺癌早筛的特异性甲基化引物，其特征在于：还包括对应的内参引物、内参引物探针；其中，所述内参引物的序列如下：

Seq ID NO.7：F-GTGATGGAGGAGGTTTAGTAAGTT，

Seq ID NO.8：R-CCAATAAAACCTACTCCTCCCTTAA；

内参引物探针序列如下：

SEQ ID NO.9：JOE-ACCACCACCCAACACACAATAACAAACACA-BHQ1。

3.肺癌早期筛查方法，其特征在于包括以下步骤：

S1.提取血浆中游离的cfDNA；

S2.将cfDNA进行亚硫酸盐转化成BisDNA；

S3.将权利要求2的引物混合物与PCR预混液混合配制成PCR反应体系；

S4.将步骤S2制得的BisDNA加入S3制得的PCR反应体系，进行多重PCR扩增反应；

S5.评估肺癌风险。

4.根据权利要求3所述的筛查方法，其特征在于所述S1具体为：采用MagMax Cell FreeDNAIsolation K试剂盒提取血液中的cfDNA。

5.根据权利要求3所述的筛查方法，其特征在于所述S2具体为：采用EZDNAMethylation-Lightning Kit对DNA样本进行亚硫酸盐转化。

6.根据权利要求3所述的筛查方法，其特征在于所述S3中，引物混合物与PCR预混液的体积比为1：3。

7.根据权利要求3所述的筛查方法，其特征在于所述S4的扩增反应程序为：95℃/15min，62℃/5s，1个循环；56℃/45s，95℃/10s，40个循环；40℃/5s，1个循环。