[发明专利]一种检测FXN致病基因突变的方法

说明书

本发明涉及一种检测FXN致病基因突变的方法，其步骤如下：S1，提取被检测者的DNA；S2，以弗里德赖希氏共济失调综合征的致病基因FXN为靶向目标并提取其前后1kb的序列设计扩增引物FXN Forward和FXN Reward，之后将致病基因FXN外显子2包含GAA核苷酸序列拷贝的片段进行PCR扩增反应；S3，比较被检测者FXN的扩增片段和正常FXN的扩增片段的大小；S4，验证被检测者FXN的扩增片段的大小。该发明利用FXN基因序列中不稳定的GAA拷贝，将包含GAA重复序列的片段扩增出来，直接通过PCR产物的大小区分FXN致病基因突变，操作简单方便，能高效的检测FXN致病基因突变。

技术领域

本发明涉及遗传病致病基因的检测，尤其是一种检测FXN致病基因突变的方法。

背景技术

FXN基因编码线粒体蛋白，在调节线粒体铁转运和呼吸方面起作用，与过氧化物酶体脂质代谢和HIF-2-α转录因子网络途径相关。在FXN基因的内含子中GAA核苷酸序列有8-33次拷贝，而当这种不稳定的序列拷贝数大于90次，就会导致弗里德赖希氏共济失调。弗里德赖希氏共济失调是最常见的遗传性共济失调，通常表现在青春期之前，表现为不协调的肢体动作，构音障碍，眼球震颤，腱反射减弱或缺失，位置和振动感觉缺陷，脊柱侧弯，弓形足和锤脚趾，疾病的严重程度随拷贝次数增加而变化。现有的检测FXN基因的技术主要是基于某个突变位点的PCR和测序方法，步骤繁琐，不易操作，费用昂贵，不利于实际应用。

发明内容

针对现有的不足，本发明提供一种检测FXN致病基因突变的方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种检测FXN致病基因突变的方法，步骤如下：

S1，提取被检测者的DNA；

S2，以弗里德赖希氏共济失调综合征的致病基因FXN为靶向目标并提取其前后1kb的序列设计扩增引物FXN Forward和FXN Reward，之后将致病基因FXN外显子2包含GAA核苷酸序列拷贝的片段进行PCR扩增反应；

S3，通过琼脂糖凝胶电泳比较被检测者FXN的扩增片段和正常FXN的扩增片段的大小；

S4，在被检测者FXN的扩增片段大于787bp时验证被检测者FXN的扩增片段的大小

作为优选，所述FXN Forward扩增引物的引物序列为：TGTTGCTCTCCGGAGTTTGT，所述FXN Reward扩增引物的引物序列为：TCATGGCCACACTTGCCTAT。

作为优选，所述FXN扩增片段序列为：TGTTGCTCTCCGGAGTTTGTACTTTAGGCTTGAACTTCCCACACGTGTTATTTGGCCCACATTGTGTTTGAAGAAACTTTGGGATTGGTTGCCAGTGCTTAAAAGTTAGGACTTAGAAAATGGATTTCCTGGCAGGACGCGGTGGCTCATGCCCATAATCTCAGCACTTTGGGAGGCCTAGGAAGGTGGATCACCTGAGGTCCGGAGTTCAAGACTAACCTGGCCAACATGGTGAAACCCAGTATCTACTAAAAAATACAAAAAAAAAAAAAAAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAAATAAAGAAAAGTTAGCCGGGCGTGGTGTCGCGCGCCTGTAATCCCAGCTACTCCAGAGGCTGCGGCAGGAGAATCGCTTGAGCCCGGGAGGCAGAGGTTGCATTAAGCCAAGATCGCCCAATGCACTCCGGCCTGGGCGACAGAGCAAGACTCCGTCTCAAAAAATAATAATAATAAATAAAAATAAAAAATAAAATGGATTTCCCAGCATCTCTGGAAAAATAGGCAAGTGTGGCCATGA。