[发明专利]靶向激活雌激素受体GPER在抗急性髓系白血病中的应用

说明书

本发明涉及靶向激活雌激素受体GPER在抗急性髓系白血病细胞方面的应用，属于生物医学研究技术领域。本发明要解决的技术问题是为治疗急性髓系白血病提供一种新的分子靶点。GPER在急性髓系白血病中的表达水平较健康人低；利用GPER特异性激动剂靶向激活GPER，能够有效地抑制白血病细胞的生长能力，并且抑制白血病细胞周期，使大部分细胞阻滞在G2期，促进细胞凋亡。新型雌激素膜受体GPER有望成为急性髓系白血病新的分子治疗靶点。

技术领域

本发明属于生物医学研究技术领域，具体涉及新型雌激素受体GPER激活在抗急性髓系白血病中的应用。

背景技术

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是一类造血细胞发生遗传学改变、进而衍生为高度异质性的血液系统恶性肿瘤，是成人急性白血病最常见的类型。众所周知，AML主要的治疗方法是干细胞移植和化疗干细胞移植治疗具有一定的限制性，标准化疗则是“7+3”方案，即采用7天阿糖胞苷联合3天柔红霉素等蒽环类药物进行化疗，但仍有40％的患者未达到完全缓解。因此，亟须进一步寻找用于治疗AML的特异性靶点及精准化疗药物。

随着人们对肿瘤生物学行为认识的不断深入，性别差异被报道与肿瘤的发生率和总体生存率密切相关。值得注意的是，雌激素是性别差异的重要影响因素，并且雌激素主要通过雌激素受体发挥作用。近年来，雌激素受体也成为研究的热点。其中，G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor，GPER)是一种新型的雌激素膜受体，其介导的雌激素效应与经典的雌激素核受体(ERα，ERβ)介导的基因组效应截然不同，表现出“快速”、“非基因组”信号活化等特点。GPER激活常通过MAPK或PI3K信号通路调控肿瘤细胞的增殖、周期、凋亡等生物学行为。最新研究发现，GPER特异性激动剂G-1靶向激活GPER从而抑制乳腺癌、结直肠癌、肝细胞癌和套细胞淋巴瘤等癌症的发生发展。然而，靶向激活GPER在急性髓系白血病进展中的作用还未见报道。

发明内容

1.本发明要解决的技术问题是为治疗急性髓系白血病提供一种新的策略，以解决背景技术中所提出的问题。

2.为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种实验性验证靶向激活雌激素受体GPER在治疗急性髓系白血病方面的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)检测GPER在白血病中的表达情况：首先，利用Oncomine和Beat AML数据库分析白血病患者GPER的基因表达水平以及GPER在男性和女性患者中的表达是否存在差异；其次，利用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR，qRT-PCR),蛋白质印迹法(Western Blotting)，免疫组化试验和免疫荧光试验检测白血病原代细胞和细胞系中GPER的表达水平和定位；最后，利用http://www.urogene.org/cgi-bin/methprimer/methprimer.cgi网站和亚硫酸氢基因组DNA测序分析GPER的CpG岛上的甲基化位点,并用去甲基化药物5-Aza处理后检测GPER的mRNA表达水平。

(2)GPER特异性激动剂G-1对白血病细胞增殖和周期的影响：首先采用GPER的特异性激动剂G-1处理白血病细胞系、白血病原代细胞及健康人的外周血CD34+细胞，然后利用活细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8，CCK-8)、5-乙炔基-2-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine，EdU)细胞增殖检测试剂盒和克隆形成试验检测白血病细胞增殖能力的改变。此外，采用不同浓度的G-1处理白血病细胞24h，再利用流式细胞术(flow cytometry，FCM)观察细胞周期的改变；进一步利用Western Blotting检测细胞周期相关蛋白的改变。